Methylation-specipc PCR (MSP) Kit

Methylation-specific PCR ထောက်လှမ်းရေးကိရိယာ။

MSP DNA Polymerase သည်ပဋိပစ္စည်းများဖြင့်ပြုပြင်ထားသော thermostable polymerase ဖြစ်ပြီး 10 × MSP PCR Buffer သည် PCR ကြားခံတစ်ခုဖြစ်သည်။ MSP တုံ့ပြန်မှု ၎င်းသည် TIANGEN DNA Bisulfite Conversion Kit (4992447) နှင့်လိုက်ဖက်သည်။

ကြောင်။ မဟုတ်ဘူး ထုပ်ပိုးမှုအရွယ်အစား
4992759 ကြိုတင်ပြင်ဆင်မှု ၅၀

ကုန်ပစ္စည်းအသေးစိတ်

လုပ်ငန်းအသွားအလာ

စမ်းသပ်ဥပမာများ

အမြဲမေးလေ့ရှိသောမေးခွန်းများ

ကုန်ပစ္စည်းတံဆိပ်များ

အင်္ဂါရပ်များ

product ထုတ်ကုန်တွင်လျင်မြန်မှု၊ ရိုးရှင်းမှု၊ မြင့်မားသောအာရုံခံစားနိုင်မှု၊ ခိုင်မာတိကျမှုနှင့်ကောင်းမွန်တည်ငြိမ်မှုစသည့်အားသာချက်များရှိသည်။

သတ်မှတ်ချက်

အမျိုးအစား: MSP DNA Polymerase
နမူနာ <၅၀၀ ng
အသုံးချမှုများသည် genomic DNA ၏ methylation လက္ခဏာများကိုခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန် methylation အတွက်အထူး PCR (MSP) နည်းလမ်းအတွက်သင့်တော်သည်။

ထုတ်ကုန်အားလုံးသည် ODM/OEM အတွက်စိတ်ကြိုက်ပြုလုပ်နိုင်ပါသည်။ အသေးစိတ်အတွက်၊ကျေးဇူးပြုပြီး Customized Service (ODM/OEM) ကိုနှိပ်ပါ။


  • ယခင်:
  • နောက်တစ်ခု:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×

    1. Methylation-Specific PCR (MSP) Kit ကို 20 μlတုံ့ပြန်မှုစနစ်ဖြင့် bisulfite ကုသထားသော genomic DNA ကိုပုံစံခွက်အဖြစ် သုံး၍ bp အပိုင်းအစ ၄၀၀ ကိုချဲ့ရန်အသုံးချခဲ့သည်။

    Experimental Exampl

    ၂။ PCR တုံ့ပြန်မှုစက်ဝန်းသတ်မှတ်ခြင်း

    Experimental Exampl

     

    Experimental Examples ၁: ကုန်ပစ္စည်းပေးသွင်းသူကဆောင်ရွက်သောနမူနာများ၊
    2: ပေးသွင်းသူ B မှဆောင်ရွက်သောနမူနာများ
    3: TIANGEN ကုသလနမူနာ 4: NTC; M: D2000
    Experimental Examples ၁-၆
    6 ထပ်ခါတလဲလဲ;
    7: ကုန်ပစ္စည်းပေးသွင်းသူတစ် ဦး ကပြုပြင်ထားသောနမူနာ;
    8: NTC; Bio2-F/R နှင့် P16- Me-F/R: ထောက်လှမ်း primers နှစ်ခု
    Q: အသံချဲ့စက်များမရှိပါ

    A-1 Template

    template ပုံစံတွင်ပရိုတင်းအညစ်အကြေးများ (သို့) Taq inhibitors များပါ ၀ င်သည်။

    template ပုံစံခွက်၏ denaturation သည်မပြည့်စုံပါ - denaturation temperature ကိုသင့်လျော်စွာတိုးမြှင့်ပေးပြီး denaturation အချိန်ကိုရှည်စေသည်။

    ■ပုံစံခွက်ပျက်စီးခြင်း —— ပုံစံခွက်ကိုပြန်လည်ပြင်ဆင်ပါ။

    A-2 Primer ပါ

    ers primer များ၏အရည်အသွေးညံ့ဖျင်းခြင်း-primer ကိုပြန်လည်ပေါင်းစပ်ခြင်း

    er Primer ပျက်စီးခြင်း —— ထိန်းသိမ်းမှုအတွက် high concentration primers များကိုအသေးငယ်ဆုံးဖြစ်အောင်စုဆောင်းပါ။ အအေးခဲခြင်း၊ အရည်ပျော်ခြင်း (သို့) ၄ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်ရေရှည်သိုလှောင်ခြင်းကိုရှောင်ကြဉ်ပါ။

    ers primer များ၏မမှန်ကန်သောဒီဇိုင်း (ဥပမာ primer အရှည်မလုံလောက်ခြင်း၊ primer များအကြား dimer ဖွဲ့ခြင်း၊ )

    A-3 Mg၂+အာရုံစူးစိုက်မှု

    မောင်မောင်၂+ အာရုံစူးစိုက်မှုအလွန်နည်းသည် - Mg ကိုမှန်ကန်စွာတိုးမြှင့်ပါ၂+ အာရုံစူးစိုက်မှု: Mg ကိုပိုကောင်းအောင်လုပ်ပါ၂+ အကောင်းဆုံး Mg ကိုဆုံးဖြတ်ရန် ၁ မီလီမီတာမှ ၃ မီတာအထိတုံ့ပြန်မှုများဆက်တိုက်ပြုလုပ်ပြီးအာရုံစူးစိုက်မှုကိုအာရုံစူးစိုက်မှု၂+ ပုံစံတစ်ခုနှင့် primer တစ်ခုစီအတွက်အာရုံစူးစိုက်မှု

    A-4 Annealing အပူချိန်

    an မြင့်မားသောမီးခံအပူချိန်သည် primer နှင့် template ၏စည်းနှောင်အားကိုသက်ရောက်မှုရှိသည်။ —— မီးလောင်ကျွမ်းထားသောအပူချိန်ကိုလျှော့ချပြီး ၂ ဒီဂရီဆဲလ်စီးယပ်စ်ဖြင့်အခြေအနေကိုပိုကောင်းအောင်လုပ်ပါ။

    A-5 Extension အချိန်

    extension တိုတောင်းသောတိုးချဲ့အချိန် —— တိုးချဲ့မှုအချိန်ကိုတိုးပါ။

    Q: မှားယွင်းတဲ့အပြုသဘော

    Phenomena: အနုတ်လက္ခဏာနမူနာများသည်ပစ်မှတ်အစဉ်လိုက်တီးဝိုင်းများကိုလည်းပြသည်။

    PCR ၏ A-1 ညစ်ညမ်းမှု

    target ပစ်မှတ်ဆင့်ပွားခြင်း (သို့) ချဲ့ထွင်ထားသောထုတ်ကုန်များ၏ညစ်ညမ်းမှုကိုဖြတ်ပါ၊ အနုတ်လက္ခဏာနမူနာတွင် ဦး တည်ချက်ပါ ၀ င်သောနမူနာကိုပိုက်ဖြင့်မပစ်ပါနှင့်၊ centrifuge ပြွန်မှယိုစေပါ။ ဓာတ်ကူပစ္စည်းများသို့မဟုတ်ကိရိယာများသည်ရှိပြီးသား nucleic အက်ဆစ်များကိုဖယ်ရှားရန် autoclaved ဖြစ်သင့်ပြီးညစ်ညမ်းမှုတည်ရှိမှုကိုအနုတ်လက္ခဏာထိန်းချုပ်မှုစမ်းသပ်မှုများဖြင့်ဆုံးဖြတ်သင့်သည်။

    ■ Reagent ညစ်ညမ်းမှု - ဓာတ်ကူပစ္စည်းများကိုစုဆောင်းပြီးအပူချိန်နိမ့်သောနေရာတွင်ထားပါ။

    A-2 Primer

    မောင်မောင်၂+ အာရုံစူးစိုက်မှုအလွန်နည်းသည် - Mg ကိုမှန်ကန်စွာတိုးမြှင့်ပါ၂+ အာရုံစူးစိုက်မှု: Mg ကိုပိုကောင်းအောင်လုပ်ပါ၂+ အကောင်းဆုံး Mg ကိုဆုံးဖြတ်ရန် ၁ မီလီမီတာမှ ၃ မီတာအထိတုံ့ပြန်မှုများဆက်တိုက်ပြုလုပ်ပြီးအာရုံစူးစိုက်မှုကိုအာရုံစူးစိုက်မှု၂+ ပုံစံတစ်ခုနှင့် primer တစ်ခုစီအတွက်အာရုံစူးစိုက်မှု

    ro မမှန်ကန်သော primer ဒီဇိုင်း၊ ပစ်မှတ်အစီအစဉ်သည်ပန်းတိုင်မဟုတ်သောအစီအစဉ်နှင့်တူညီသည်။ --- ပြန်လည်ဒီဇိုင်းဒီဇိုင်းများ

    Q: Non- တိကျတဲ့အသံချဲ့စက်

    ဖြစ်ရပ်များ: PCR အသံချဲ့စက်များသည်မျှော်မှန်းထားသောအရွယ်အစားနှင့်ကြီးကြီးမားမား၊ သေးငယ်သည်ဖြစ်စေ၊ တစ်ခါတစ်ရံတွင်သီးခြားအသံချဲ့ခွင်များနှင့်မတိကျသောအသံချဲ့ခွင်များဖြစ်ပေါ်သည်။

    A-1 Primer ဖြစ်သည်

    prim primer တိကျမှုအားနည်းသည်

    --- ပြန်လည်ဒီဇိုင်း primer

    prim primer အာရုံစူးစိုက်မှုအလွန်မြင့်မားသည် - denaturation temperature ကိုမှန်မှန်ကန်ကန်မြင့်တက်စေပြီး denaturation ကြာရှည်စေသည်။

    A-2 Mg၂+ အာရုံစူးစိုက်မှု

    မောင်၂+ အာရုံစူးစိုက်မှုမြင့်လွန်းသည် - Mg2+ အာရုံစူးစိုက်မှုကိုမှန်ကန်စွာလျှော့ချပါ၊ Mg ကိုပိုကောင်းအောင်လုပ်ပါ၂+ အကောင်းဆုံး Mg ကိုဆုံးဖြတ်ရန် ၁ မီလီမီတာမှ ၃ မီတာအထိတုံ့ပြန်မှုများဆက်တိုက်ပြုလုပ်ပြီးအာရုံစူးစိုက်မှုကိုအာရုံစူးစိုက်မှု၂+ ပုံစံတစ်ခုနှင့် primer တစ်ခုစီအတွက်အာရုံစူးစိုက်မှု

    A-3 အပူထိန်းနိုင်သော polymerase

    enzy အလွန်အကျွံအင်ဇိုင်းပမာဏ — 0.5 ၀.၅ ယူနစ်ကြားတွင်သင့်တော်သောအင်ဇိုင်းပမာဏကိုသင့်တော်စွာလျှော့ချပါ။

    A-4 Annealing အပူချိန်

    ne မီးခံအပူချိန်သည်နိမ့်လွန်းသည်-သင့်လျော်သော annealing အပူချိန်ကိုသင့်လျော်စွာတိုးမြှင့်ခြင်း (သို့) အဆင့်နှစ်ဆင့်ခွဲခြင်းနည်းလမ်းကိုသုံးပါ။

    A-5 PCR ဟုတ်ရဲ့လား

    PC PCR သံသရာများလွန်းခြင်း - PCR စက်ဝန်းအရေအတွက်ကိုလျှော့ချပါ။

    မေး။ ပါးလွှာသောသို့မဟုတ်လိမ်းကျံထားသောတီးဝိုင်းများ

    A-1 Primer ဖြစ်သည်—- ပိုဆိုးသောထူးခြားမှု —— primer ကိုပြန်လည်ဒီဇိုင်းဆွဲပါ၊ primer ၏အနေအထားနှင့်အရှည်ကိုပြောင်းပါ။ သို့မဟုတ် nested PCR လုပ်ဆောင်ပါ။

    A-2 Template သည် DNA ဖြစ်သည်

    —— ပုံစံခွက်သည်မသန့်ရှင်းပါ —— ပုံစံခွက်ကိုသန့်စင်ပါ၊ သို့မဟုတ်သန့်ရှင်းသောဆေးသေတ္တာများဖြင့် DNA ကိုထုတ်ယူပါ။

    A-3 Mg၂+ အာရုံစူးစိုက်မှု

    --- မောင်၂+ အာရုံစူးစိုက်မှုအလွန်မြင့်မားသည် - Mg ကိုမှန်ကန်စွာလျှော့ချပါ၂+ အာရုံစူးစိုက်မှု: Mg ကိုပိုကောင်းအောင်လုပ်ပါ၂+ အကောင်းဆုံး Mg ကိုဆုံးဖြတ်ရန် ၁ မီလီမီတာမှ ၃ မီတာအထိတုံ့ပြန်မှုများဆက်တိုက်ပြုလုပ်ပြီးအာရုံစူးစိုက်မှုကိုအာရုံစူးစိုက်မှု၂+ ပုံစံတစ်ခုနှင့် primer တစ်ခုစီအတွက်အာရုံစူးစိုက်မှု

    A-4 dNTP

    —— dNTP ၏အာရုံစူးစိုက်မှုမြင့်လွန်းသည် —— dNTP ၏အာရုံစူးစိုက်မှုကိုသင့်လျော်စွာလျှော့ချပါ

    A-5 Annealing အပူချိန်

    —— အလွန်နည်းသော annealing အပူချိန် —— သင့်လျော်သော annealing အပူချိန်ကိုသင့်လျော်စွာတိုးမြှင့်ပါ

    A-6 Cycles

    —— သံသရာအလွန်များ —— စက်ဝန်းနံပါတ်ကိုပိုကောင်းအောင်လုပ်ပါ

    မေး - ၅၀ μl PCR တုံ့ပြန်မှုစနစ်တွင် DNA ပုံစံခွက်ကိုမည်မျှထည့်သင့်သနည်း။
    ytry
    မေး: အပိုင်းအစရှည်တွေကိုဘယ်လိုချဲ့မလဲ။

    ပထမအဆင့်သည်သင့်တော်သော polymerase ကိုရွေးချယ်ရန်ဖြစ်သည်။ ပုံမှန် Taq polymerase သည် 3'-5 'exonuclease လုပ်ဆောင်ချက်မရှိခြင်းကြောင့်စာပြန်စစ်။ မရပါကမကိုက်ညီလျှင်အပိုင်းအစများ၏တိုးချဲ့မှုထိရောက်မှုကိုများစွာလျော့ကျစေသည်။ ထို့ကြောင့်ပုံမှန် Taq polymerase သည် 5 kb ထက်ကြီးသောပစ်မှတ်အပိုင်းအစများကိုထိထိရောက်ရောက်မချဲ့နိုင်ပါ။ Taq polymerase ကိုအထူးပြုပြင်မွမ်းမံခြင်းသို့မဟုတ်အခြားမြင့်မားသောသစ္စာရှိမှု polymerase တို့ဖြင့် extension efficiency ကိုမြှင့်တင်ရန်နှင့်ရှည်လျားသောအပိုင်းအစချဲ့ထွင်မှုလိုအပ်ချက်များကိုဖြည့်ဆည်းရန်ရွေးချယ်သင့်သည်။ ထို့အပြင်အပိုင်းအစရှည်များချဲ့ခြင်းသည် primer ဒီဇိုင်း၊ denaturation time၊ extension time၊ buffer pH စသည်ဖြင့်လိုက်လျောညီထွေဖြစ်အောင်ညှိရန်လိုအပ်သည်။ အများအားဖြင့် 18-24 bp ပါသော primers များသည်အထွက်နှုန်းပိုကောင်းစေနိုင်သည်။ ပုံစံခွက်ပျက်စီးမှုကိုကာကွယ်ရန် ၉၄ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင် denaturation time ကိုတစ်စက္ကန့် ၃၀ သို့လျှော့ချရန်နှင့်အသံချဲ့စက်မတိုင်မီအပူချိန် ၉၄ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်သို့ ၁ မိနစ်ထက်နည်းသင့်သည်။ ၎င်းအပြင်တိုးချဲ့အပူချိန်ကို ၆၈ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်ခန့်တွင်သတ်မှတ်ပေးပြီးတိုးချဲ့ချိန်ကို ၁ kb/min နှုန်းအတိုင်းဒီဇိုင်းဆွဲခြင်းဖြင့်ရှည်လျားသောအပိုင်းအစများကိုထိရောက်စွာချဲ့ထွင်နိုင်သည်။

    Q: PCR ရဲ့အသံချဲ့ထွင်မှုကိုဘယ်လိုတိုးတက်အောင်လုပ်မလဲ။

    PCR အသံချဲ့စက်၏အမှားနှုန်းကိုမြင့်မားသောတည်ကြည်မှုနှင့်အတူအမျိုးမျိုးသော DNA polymerases များကို သုံး၍ လျှော့ချနိုင်သည်။ ယခုအချိန်ထိ Taq DNA polymerases များအားလုံးတွင် Pfu အင်ဇိုင်းသည်အနိမ့်ဆုံးအမှားနှုန်းနှင့်အမြင့်ဆုံးသစ္စာရှိမှု (ပူးတွဲဇယားတွင်ကြည့်ပါ) ။ အင်ဇိုင်းရွေးချယ်မှုအပြင်သုတေသီများသည်ကြားခံဖွဲ့စည်းမှုကိုတိုးတက်စေခြင်း၊ အပူထိန်းနိုင်သော polymerase ၏အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့် PCR စက်ဝန်းအရေအတွက်ပိုမိုကောင်းမွန်စေခြင်းအပါအ ၀ င်တုံ့ပြန်မှုအခြေအနေများကိုပိုမိုကောင်းမွန်စေခြင်းဖြင့်ပိုမိုလျှော့ချနိုင်သည်။

    မင်းရဲ့ message ကိုဒီမှာရေးပြီးငါတို့ဆီပို့ပါ