Mouse Tissue တိုက်ရိုက် PCR Kit

ထုတ်ယူခြင်းမပြုဘဲတိရိစ္ဆာန်တစ်သျှူးနမူနာများမှပစ်မှတ်ဗီဇကိုလျင်မြန်စွာချဲ့ထွင်သည်။

Mouse Tissue Direct PCR Kit သည်လျင်မြန်သောမျိုးရိုးဗီဇ DNA ပြင်ဆင်မှုနှင့် PCR ချဲ့ထွင်ရေးအတွက်ဓာတ်ကူပစ္စည်းအားလုံးပါ ၀ င်သောထူးခြားသောထုပ်ပိုးမှုဒီဇိုင်းကိုလက်ခံသည်။ ၎င်းသည် mouse တစ်သျှူးများ (အမြီး၊ နားနှင့်ခြေချောင်းများ) မှနောက်တစ်ဆင့် PCR ချဲ့ထွင်ခြင်းနှင့်ထောက်လှမ်းခြင်းတို့အတွက်တစ်ဆင့်ပြီးတစ်ဆင့် genome DNA သန့်စင်မှုအတွက်အသုံးပြုနိုင်သည်။ လုပ်ငန်းစဉ်တစ်ခုလုံးသည်တစ်သားတည်းဖြစ်အောင်ပြုလုပ်ခြင်း၊ ကွဲခြင်း၊ နေ့ချင်းညချင်းအစာချေဖျက်ခြင်း၊ အော်ဂဲနစ်အရည်ပျော်ထုတ်ယူခြင်း၊ အီသနောမိုးရွာသွန်းမှုသို့မဟုတ်ကော်လံသန့်စင်ခြင်းအဆင့်များမပါဝင်ပါ။ ရိုးရှင်းသော၊ လျင်မြန်သောလုပ်ဆောင်ချက်များဖြင့်တည်ငြိမ်သောရလဒ်များကိုရနိုင်သည်။

ဤကိရိယာမှပေးသော 2 × Dir PCR MasterMix သည်ပရိုတင်းကဲ့သို့အညစ်အကြေးများကိုဖယ်ရှားရန်မလိုဘဲအကျိုးရှိစွာနှင့်အထူးချဲ့ထွင်နိုင်သောအလွန်လိုက်ဖက်သော PCR ဓာတ်ကူပစ္စည်းတစ်ခုဖြစ်သည်။ ဤဓာတ်ကူပစ္စည်းတွင်ပြင်ဆင်ထားသောပဋိပစ္စည်းတစ်ခုပါ ၀ င်သည်တက်ခ် DNA polymerase, dNTPs, MgCl₂PCR တုံ့ပြန်မှုအတွက် enhancer၊ optimizer နှင့် stabilizer PCR တုံ့ပြန်မှုကိုအကြမ်းဖျင်းထုတ်ယူထားသောပုံစံခွက်နှင့်တိကျသော primers များတွင်ထည့်ခြင်းဖြင့်လုပ်ဆောင်နိုင်သည်။ လုပ်ငန်းစဉ်တစ်ခုလုံးသည်မြန်ဆန်၊ ရိုးရှင်း၊ ထိလွယ်ရှလွယ်၊ တိကျပြီးတည်ငြိမ်သည်၊ ၎င်းသည် high-throughput စိစစ်မှုအတွက်အထူးသင့်တော်သည်။ 2 × Dir PCR MasterMix တွင် premix electrophoresis ဆိုးဆေးပါ ၀ င်သည်၊ ထို့ကြောင့် PCR ထုတ်ကုန်များကိုဓာတ်ပြုပြီးနောက် electrophoresis ထောက်လှမ်းမှုအတွက်တိုက်ရိုက်ပို့နိုင်သည်။ PCR ထုတ်ကုန်၏ ၃ 'အဆုံးတွင် A-tailing ရှိပြီး TA cloning အတွက်သုံးနိုင်သည်။

ကြောင်။ မဟုတ်ဘူး	ထုပ်ပိုးမှုအရွယ်အစား
4992531	20 µl × 50 rxn
4992532	20 µl × 200 rxn

ကျွန်ုပ်တို့ထံအီးမေးလ်ပို့ပါ

ကုန်ပစ္စည်းအသေးစိတ်

လုပ်ငန်းအသွားအလာ

စမ်းသပ်ဥပမာ

အမြဲမေးလေ့ရှိသောမေးခွန်းများ

ကုန်ပစ္စည်းတံဆိပ်များ

အင်္ဂါရပ်များ

■ရိုးရှင်းပြီးမြန်ဆန်သည်။ Genomic DNA ကိုနိုက်ထရိုဂျင်အရည်ကြိတ်ခြင်းနှင့်အော်ဂဲနစ်အရည်ပျော်ထုတ်ယူခြင်းမရှိဘဲမိနစ် ၆၀ တွင်ကြွက်တစ်သျှူးများမှလျင်မြန်စွာထုတ်ယူနိုင်သည်။
■ကျယ်ပြန့်သောအသုံးချမှု၊ ၎င်းသည်ကြွက်အမြီး၊ နား၊ ခြေချောင်းနှင့်အခြားတစ်သျှူးများမှမျိုးရိုးဗီဇ DNA ကိုတစ်ဆင့်ထုတ်ယူရန်သင့်တော်သည်။
specific မြင့်မားသောအသေးစိတ်အချက်-ဤထုတ်ကုန်တွင်သုံးသော Taq polymerase သည် genotyping နှင့် transgenic identification အတွက်အထူးသင့်တော်သော template နှင့် primer affinity နှင့် amplification specific တို့ပါ ၀ င်သော antibody ကိုပြုပြင်ထားသော hot-start enzyme တစ်ခုဖြစ်သည်။
■မျိုးရိုးဗီဇထောက်လှမ်းခြင်း၊ ထုတ်ကုန်သည်ယုံကြည်စိတ်ချရသောရလဒ်များဖြင့်လည်ပတ်ရန်လွယ်ကူပြီး၎င်းသည် mouse တစ်သျှူးများကို high-throughput ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းနှင့်ထောက်လှမ်းခြင်းတို့အတွက်အထူးသင့်တော်သည်။

ထုတ်ကုန်အားလုံးသည် ODM/OEM အတွက်စိတ်ကြိုက်ပြုလုပ်နိုင်ပါသည်။ အသေးစိတ်အတွက်၊ကျေးဇူးပြုပြီး Customized Service (ODM/OEM) ကိုနှိပ်ပါ။

ယခင်: သွေးတိုက်ရိုက် PCR Kit

နောက်တစ်ခု: လျင်မြန်သော site-Directed Mutagenesis Kit

Experimental Example

Mouse Tissue Direct PCR Kit နှင့်ပေးသွင်းသူ A မှသက်ဆိုင်ရာထုတ်ကုန်ကို ၁၀၀၀ bp၊ ၂၀၀၀ bp နှင့် 3000 bp အပိုင်းအစများကိုကြွက်အမြီး၊ ကြွက်နားနှင့်ကြွက်အမြီးတို့မှအသီးသီးထုတ်လွှင့်သည်။ ရလဒ်အနေဖြင့် Mouse Tissue Direct PCR Kit သည်ပိုမိုတိကျပြီးအောင်မြင်မှုနှုန်းရှိသည်။

Q: အသံချဲ့စက်များမရှိပါ

A-1 Template

template ပုံစံတွင်ပရိုတင်းအညစ်အကြေးများ (သို့) Taq inhibitors များပါ ၀ င်သည်။

template ပုံစံခွက်၏ denaturation သည်မပြည့်စုံပါ - denaturation temperature ကိုသင့်လျော်စွာတိုးမြှင့်ပေးပြီး denaturation အချိန်ကိုရှည်စေသည်။

■ပုံစံခွက်ပျက်စီးခြင်း —— ပုံစံခွက်ကိုပြန်လည်ပြင်ဆင်ပါ။

A-2 Primer ပါ

ers primer များ၏အရည်အသွေးညံ့ဖျင်းခြင်း-primer ကိုပြန်လည်ပေါင်းစပ်ခြင်း

er Primer ပျက်စီးခြင်း —— ထိန်းသိမ်းမှုအတွက် high concentration primers များကိုအသေးငယ်ဆုံးဖြစ်အောင်စုဆောင်းပါ။ အအေးခဲခြင်း၊ အရည်ပျော်ခြင်း (သို့) ၄ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်ရေရှည်သိုလှောင်ခြင်းကိုရှောင်ကြဉ်ပါ။

ers primer များ၏မမှန်ကန်သောဒီဇိုင်း (ဥပမာ primer အရှည်မလုံလောက်ခြင်း၊ primer များအကြား dimer ဖွဲ့ခြင်း၊ )

A-3 Mg^၂+အာရုံစူးစိုက်မှု

မောင်မောင်^၂+ အာရုံစူးစိုက်မှုအလွန်နည်းသည် - Mg ကိုမှန်ကန်စွာတိုးမြှင့်ပါ^၂+အာရုံစူးစိုက်မှု: Mg ကိုပိုကောင်းအောင်လုပ်ပါ^၂+ အကောင်းဆုံး Mg ကိုဆုံးဖြတ်ရန် ၁ မီလီမီတာမှ ၃ မီတာအထိတုံ့ပြန်မှုများဆက်တိုက်ပြုလုပ်ပြီးအာရုံစူးစိုက်မှုကိုအာရုံစူးစိုက်မှု^၂+ ပုံစံတစ်ခုနှင့် primer တစ်ခုစီအတွက်အာရုံစူးစိုက်မှု

A-4 Annealing အပူချိန်

an မြင့်မားသောမီးခံအပူချိန်သည် primer နှင့် template ၏စည်းနှောင်အားကိုသက်ရောက်မှုရှိသည်။ —— မီးလောင်ကျွမ်းထားသောအပူချိန်ကိုလျှော့ချပြီး ၂ ဒီဂရီဆဲလ်စီးယပ်စ်ဖြင့်အခြေအနေကိုပိုကောင်းအောင်လုပ်ပါ။

A-5 Extension အချိန်

extension တိုတောင်းသောတိုးချဲ့အချိန် —— တိုးချဲ့မှုအချိန်ကိုတိုးပါ။

Q: မှားယွင်းတဲ့အပြုသဘော

Phenomena: အနုတ်လက္ခဏာနမူနာများသည်ပစ်မှတ်အစဉ်လိုက်တီးဝိုင်းများကိုလည်းပြသည်။

PCR ၏ A-1 ညစ်ညမ်းမှု

target ပစ်မှတ်ဆင့်ပွားခြင်း (သို့) ချဲ့ထွင်ထားသောထုတ်ကုန်များ၏ညစ်ညမ်းမှုကိုဖြတ်ပါ၊ အနုတ်လက္ခဏာနမူနာတွင် ဦး တည်ချက်ပါ ၀ င်သောနမူနာကိုပိုက်ဖြင့်မပစ်ပါနှင့်၊ centrifuge ပြွန်မှယိုစေပါ။ ဓာတ်ကူပစ္စည်းများသို့မဟုတ်ကိရိယာများသည်ရှိပြီးသား nucleic အက်ဆစ်များကိုဖယ်ရှားရန် autoclaved ဖြစ်သင့်ပြီးညစ်ညမ်းမှုတည်ရှိမှုကိုအနုတ်လက္ခဏာထိန်းချုပ်မှုစမ်းသပ်မှုများဖြင့်ဆုံးဖြတ်သင့်သည်။

■ Reagent ညစ်ညမ်းမှု - ဓာတ်ကူပစ္စည်းများကိုစုဆောင်းပြီးအပူချိန်နိမ့်သောနေရာတွင်ထားပါ။

A-2 Primer

မောင်မောင်^၂+ အာရုံစူးစိုက်မှုအလွန်နည်းသည် - Mg ကိုမှန်ကန်စွာတိုးမြှင့်ပါ^၂+ အာရုံစူးစိုက်မှု: Mg ကိုပိုကောင်းအောင်လုပ်ပါ^၂+ အကောင်းဆုံး Mg ကိုဆုံးဖြတ်ရန် ၁ မီလီမီတာမှ ၃ မီတာအထိတုံ့ပြန်မှုများဆက်တိုက်ပြုလုပ်ပြီးအာရုံစူးစိုက်မှုကိုအာရုံစူးစိုက်မှု^၂+ ပုံစံတစ်ခုနှင့် primer တစ်ခုစီအတွက်အာရုံစူးစိုက်မှု

ro မမှန်ကန်သော primer ဒီဇိုင်း၊ ပစ်မှတ်အစီအစဉ်သည်ပန်းတိုင်မဟုတ်သောအစီအစဉ်နှင့်တူညီသည်။ --- ပြန်လည်ဒီဇိုင်းဒီဇိုင်းများ

Q: Non- တိကျတဲ့အသံချဲ့စက်

ဖြစ်ရပ်များ: PCR အသံချဲ့စက်များသည်မျှော်မှန်းထားသောအရွယ်အစားနှင့်ကြီးကြီးမားမား၊ သေးငယ်သည်ဖြစ်စေ၊ တစ်ခါတစ်ရံတွင်သီးခြားအသံချဲ့ခွင်များနှင့်မတိကျသောအသံချဲ့ခွင်များဖြစ်ပေါ်သည်။

A-1 Primer ဖြစ်သည်

prim primer တိကျမှုအားနည်းသည်

--- ပြန်လည်ဒီဇိုင်း primer

prim primer အာရုံစူးစိုက်မှုအလွန်မြင့်မားသည် - denaturation temperature ကိုမှန်မှန်ကန်ကန်မြင့်တက်စေပြီး denaturation ကြာရှည်စေသည်။

A-2 Mg^၂+ အာရုံစူးစိုက်မှု

မောင်^၂+ အာရုံစူးစိုက်မှုမြင့်လွန်းသည် - Mg2+ အာရုံစူးစိုက်မှုကိုမှန်ကန်စွာလျှော့ချပါ၊ Mg ကိုပိုကောင်းအောင်လုပ်ပါ^၂+ အကောင်းဆုံး Mg ကိုဆုံးဖြတ်ရန် ၁ မီလီမီတာမှ ၃ မီတာအထိတုံ့ပြန်မှုများဆက်တိုက်ပြုလုပ်ပြီးအာရုံစူးစိုက်မှုကိုအာရုံစူးစိုက်မှု^၂+ ပုံစံတစ်ခုနှင့် primer တစ်ခုစီအတွက်အာရုံစူးစိုက်မှု

A-3 အပူထိန်းနိုင်သော polymerase

enzy အလွန်အကျွံအင်ဇိုင်းပမာဏ — 0.5 ၀.၅ ယူနစ်ကြားတွင်သင့်တော်သောအင်ဇိုင်းပမာဏကိုသင့်တော်စွာလျှော့ချပါ။

A-4 Annealing အပူချိန်

ne မီးခံအပူချိန်သည်နိမ့်လွန်းသည်-သင့်လျော်သော annealing အပူချိန်ကိုသင့်လျော်စွာတိုးမြှင့်ခြင်း (သို့) အဆင့်နှစ်ဆင့်ခွဲခြင်းနည်းလမ်းကိုသုံးပါ။

A-5 PCR ဟုတ်ရဲ့လား

PC PCR သံသရာများလွန်းခြင်း - PCR စက်ဝန်းအရေအတွက်ကိုလျှော့ချပါ။

မေး။ ပါးလွှာသောသို့မဟုတ်လိမ်းကျံထားသောတီးဝိုင်းများ

A-1 Primer ဖြစ်သည်—- ပိုဆိုးသောထူးခြားမှု —— primer ကိုပြန်လည်ဒီဇိုင်းဆွဲပါ၊ primer ၏အနေအထားနှင့်အရှည်ကိုပြောင်းပါ။ သို့မဟုတ် nested PCR လုပ်ဆောင်ပါ။

A-2 Template သည် DNA ဖြစ်သည်

—— ပုံစံခွက်သည်မသန့်ရှင်းပါ —— ပုံစံခွက်ကိုသန့်စင်ပါ၊ သို့မဟုတ်သန့်ရှင်းသောဆေးသေတ္တာများဖြင့် DNA ကိုထုတ်ယူပါ။

A-3 Mg^၂+ အာရုံစူးစိုက်မှု

--- မောင်^၂+ အာရုံစူးစိုက်မှုအလွန်မြင့်မားသည် - Mg ကိုမှန်ကန်စွာလျှော့ချပါ^၂+ အာရုံစူးစိုက်မှု: Mg ကိုပိုကောင်းအောင်လုပ်ပါ^၂+ အကောင်းဆုံး Mg ကိုဆုံးဖြတ်ရန် ၁ မီလီမီတာမှ ၃ မီတာအထိတုံ့ပြန်မှုများဆက်တိုက်ပြုလုပ်ပြီးအာရုံစူးစိုက်မှုကိုအာရုံစူးစိုက်မှု^၂+ ပုံစံတစ်ခုနှင့် primer တစ်ခုစီအတွက်အာရုံစူးစိုက်မှု

A-4 dNTP

—— dNTP ၏အာရုံစူးစိုက်မှုမြင့်လွန်းသည် —— dNTP ၏အာရုံစူးစိုက်မှုကိုသင့်လျော်စွာလျှော့ချပါ

A-5 Annealing အပူချိန်

—— အလွန်နည်းသော annealing အပူချိန် —— သင့်လျော်သော annealing အပူချိန်ကိုသင့်လျော်စွာတိုးမြှင့်ပါ

A-6 Cycles

—— သံသရာအလွန်များ —— စက်ဝန်းနံပါတ်ကိုပိုကောင်းအောင်လုပ်ပါ

မေး - ၅၀ μl PCR တုံ့ပြန်မှုစနစ်တွင် DNA ပုံစံခွက်ကိုမည်မျှထည့်သင့်သနည်း။

မေး: အပိုင်းအစရှည်တွေကိုဘယ်လိုချဲ့မလဲ။

ပထမအဆင့်သည်သင့်တော်သော polymerase ကိုရွေးချယ်ရန်ဖြစ်သည်။ ပုံမှန် Taq polymerase သည် 3'-5 'exonuclease လုပ်ဆောင်ချက်မရှိခြင်းကြောင့်စာပြန်စစ်။ မရပါကမကိုက်ညီလျှင်အပိုင်းအစများ၏တိုးချဲ့မှုထိရောက်မှုကိုများစွာလျော့ကျစေသည်။ ထို့ကြောင့်ပုံမှန် Taq polymerase သည် 5 kb ထက်ကြီးသောပစ်မှတ်အပိုင်းအစများကိုထိထိရောက်ရောက်မချဲ့နိုင်ပါ။ Taq polymerase ကိုအထူးပြုပြင်မွမ်းမံခြင်းသို့မဟုတ်အခြားမြင့်မားသောသစ္စာရှိမှု polymerase တို့ဖြင့် extension efficiency ကိုမြှင့်တင်ရန်နှင့်ရှည်လျားသောအပိုင်းအစချဲ့ထွင်မှုလိုအပ်ချက်များကိုဖြည့်ဆည်းရန်ရွေးချယ်သင့်သည်။ ထို့အပြင်အပိုင်းအစရှည်များချဲ့ခြင်းသည် primer ဒီဇိုင်း၊ denaturation time၊ extension time၊ buffer pH စသည်ဖြင့်လိုက်လျောညီထွေဖြစ်အောင်ညှိရန်လိုအပ်သည်။ အများအားဖြင့် 18-24 bp ပါသော primers များသည်အထွက်နှုန်းပိုကောင်းစေနိုင်သည်။ ပုံစံခွက်ပျက်စီးမှုကိုကာကွယ်ရန် ၉၄ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင် denaturation time ကိုတစ်စက္ကန့် ၃၀ သို့လျှော့ချရန်နှင့်အသံချဲ့စက်မတိုင်မီအပူချိန် ၉၄ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်သို့ ၁ မိနစ်ထက်နည်းသင့်သည်။ ၎င်းအပြင်တိုးချဲ့အပူချိန်ကို ၆၈ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်ခန့်တွင်သတ်မှတ်ပေးပြီးတိုးချဲ့ချိန်ကို ၁ kb/min နှုန်းအတိုင်းဒီဇိုင်းဆွဲခြင်းဖြင့်ရှည်လျားသောအပိုင်းအစများကိုထိရောက်စွာချဲ့ထွင်နိုင်သည်။

Q: PCR ရဲ့အသံချဲ့ထွင်မှုကိုဘယ်လိုတိုးတက်အောင်လုပ်မလဲ။

PCR အသံချဲ့စက်၏အမှားနှုန်းကိုမြင့်မားသောတည်ကြည်မှုနှင့်အတူအမျိုးမျိုးသော DNA polymerases များကို သုံး၍ လျှော့ချနိုင်သည်။ ယခုအချိန်ထိ Taq DNA polymerases များအားလုံးတွင် Pfu အင်ဇိုင်းသည်အနိမ့်ဆုံးအမှားနှုန်းနှင့်အမြင့်ဆုံးသစ္စာရှိမှု (ပူးတွဲဇယားတွင်ကြည့်ပါ) ။ အင်ဇိုင်းရွေးချယ်မှုအပြင်သုတေသီများသည်ကြားခံဖွဲ့စည်းမှုကိုတိုးတက်စေခြင်း၊ အပူထိန်းနိုင်သော polymerase ၏အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့် PCR စက်ဝန်းအရေအတွက်ပိုမိုကောင်းမွန်စေခြင်းအပါအ ၀ င်တုံ့ပြန်မှုအခြေအနေများကိုပိုမိုကောင်းမွန်စေခြင်းဖြင့်ပိုမိုလျှော့ချနိုင်သည်။

မင်းရဲ့ message ကိုဒီမှာရေးပြီးငါတို့ဆီပို့ပါ

ထုတ်ကုန်အမျိုးအစားများ

အမေရိကန်ကိုဘာကြောင့်ရွေးတာလဲ

စတင်တည်ထောင်ကတည်းကကျွန်ုပ်တို့၏စက်ရုံသည်နိယာမကိုလိုက်နာခြင်းဖြင့်ပထမကမ္ဘာအဆင့်ထုတ်ကုန်များကိုတီထွင်ခဲ့သည်
အရည်အသွေးပထမ ကျွန်ုပ်တို့၏ထုတ်ကုန်များသည်စက်မှုလုပ်ငန်းတွင်အလွန်နာမည်ကောင်းရခဲ့ပြီးဖောက်သည်အသစ်နှင့်အဟောင်းများကြားတွင်အဖိုးတန်လက်ဖွဲ့ပစ္စည်းများဖြစ်သည်။

စုံစမ်းရန်