TIANSeq HiFi Amplification Mix

စာကြည့်တိုက်အထွက်နှုန်းမြင့်မားခြင်း၊ စာကြည့်တိုက်အထွက်နှုန်းမြင့်မားခြင်းနှင့်သစ္စာရှိမှုနိမ့်ခြင်း

TIANSeq HiFi Ampli ﬁ cation Mix သည် high-fidelity PCR amplification premix ဖြစ်ပြီး high-throughput sequencing library နှင့်အခြား PCR ဆက်စပ်ပုံတူပွားခြင်းနှင့်ထောက်လှမ်းခြင်းတို့အတွက်သင့်တော်သည်။ ကြိုတင်ရောစပ်ထားသောအဖြေတွင် Ultra HiFi DNA Polymerase သည် DNA polymerase ၏ဆက်နွယ်မှုကိုတင်းပလိတ်များဖြစ်စေသောညွှန်ကြားမော်လီကျူးဆင့်ကဲဖြစ်စဉ်နည်းပညာဖြင့်တီထွင်ထားသောလျင်မြန်။ မြင့်မားတည်ကြည်သော DNA polymerase အမျိုးအစားအသစ်တစ်ခုဖြစ်သည်။ ဤအင်ဇိုင်းသည်အသံချဲ့စက်မြန်နှုန်းနှင့်တိုးချဲ့နိုင်စွမ်းကိုတိုးတက်စေခဲ့ပြီး PCR နှင့်ထုတ်ကုန်များ၏အောင်မြင်မှုနှုန်းတိုးတက်လာသည်။ အင်ဇိုင်းတွင်အလွန်အစွမ်းထက်သော 3′- 5 ′exonuclease လုပ်ဆောင်ချက် (Proofreading activity) ပါရှိပြီး၎င်း၏တည်ကြည်မှုသည်မျိုးရိုးဗီဇနှင့်စာကြည့်တိုက်ချဲ့ထွင်မှုဖြစ်စဉ်တို့၏စစ်မှန်မှုနှင့်အတူစျေးကွက်တွင်ပင်မထုတ်ကုန်များအဆင့်သို့ရောက်ရှိနိုင်သည်။ ထို့အပြင်ထုတ်ကုန်၌ DNA polymerase သည်အပူချိန်နိမ့်အောက်တွင် non-specific amplification နှင့် enzyme လုပ်ဆောင်မှုကိုထိထိရောက်ရောက်ထိန်းချုပ်နိုင်သည့်အတွက် HotStart function ပါ ၀ င်သည်၊ ထို့ကြောင့် PCR amplification ၏တိကျမှုနှင့်တည်ငြိမ်မှုကိုသေချာစေသည်။ PCR တုံ့ပြန်မှုကိုမြှင့်တင်ခြင်းစနစ်ကို Mix ၌ပေါင်းစပ်ထားသည်၊ Mix ၏တည်ငြိမ်မှုကိုတိုးတက်ကောင်းမွန်စေရုံသာမက polymerase ၏သည်းခံနိုင်စွမ်းကို PCR တုံ့ပြန်မှု inhibitors သို့ polymerrase ၏သည်းခံနိုင်စွမ်းကိုမြှင့်တင်ပေးသည်၊ ဒါပေမယ့်လည်းကွဲပြားသော GC contents များနှင့်အတူ ultra HiFi DNA Polymerase ၏လိုက်လျောညီထွေမှုကိုတိုးတက်စေသည်။ ထုတ်ကုန်တွင်ကျယ်ပြန့်သောစံသတ်မှတ်ချက်နှင့်နမူနာထည့်သွင်းမှုအတိုင်းအတာရှိပြီး PCR တုံ့ပြန်မှု၏အခြေခံ ဦး စားပေးကိုလျော့နည်းစေသည်။

ကြောင်။ မဟုတ်ဘူး	ထုပ်ပိုးမှုအရွယ်အစား
4992369	၁ မီလီလီတာ
4992370	5 × 1 ml
4992371	5*1ml
4992372	5*1ml

ကျွန်ုပ်တို့ထံအီးမေးလ်ပို့ပါ

ကုန်ပစ္စည်းအသေးစိတ်

စမ်းသပ်ဥပမာ

အမြဲမေးလေ့ရှိသောမေးခွန်းများ

ကုန်ပစ္စည်းတံဆိပ်များ

မြစ်အောက်ပိုင်း

NGS စာကြည့်တိုက် PCR အသံချဲ့စက်၊ ပထမမျိုးဆက် PCR ချဲ့ထွင်မှု၊ မြင့်မားသောသစ္စာရှိမှုပုံတူပွားခြင်း၊ SNP ထောက်လှမ်းခြင်း၊ ဆိုဒ်အလိုက်သီးသန့်ပြောင်းလဲခြင်းစသည်

အင်္ဂါရပ်များ

■ High-efficiency amplification: ပြောင်းလဲနှုန်းကိုသေချာစေပြီး amplification သံသရာကိုလျှော့ချပါ။
■ Low Preference: ကွဲပြားသော GC% ပါဝင်သော DNA နမူနာများအတွက်ဟန်ချက်ညီစေသောချဲ့ထွင်မှုထိရောက်မှု
specific မြင့်မားသောထူးခြားချက်: HotStart ပိုင်ဆိုင်မှုနှင့်ခိုင်မာသောတိကျမှုတို့ဖြင့်
■မြင့်မားသောသစ္စာရှိမှု၊ သစ္စာသည် Taq DNA polymerase ထက်အဆ ၅၀ မြင့်သည်။
■မြင့်မားသောအာရုံခံနိုင်စွမ်း: ပုံစံသွင်းအားစုသည် ၁ pg အထိနိမ့်နိုင်သည်။

ထုတ်ကုန်အားလုံးသည် ODM/OEM အတွက်စိတ်ကြိုက်ပြုလုပ်နိုင်ပါသည်။ အသေးစိတ်အတွက်၊ကျေးဇူးပြုပြီး Customized Service (ODM/OEM) ကိုနှိပ်ပါ။

ယခင်: TIANSeq Single-Index Adapter (Illumina)၊

နောက်တစ်ခု: TIANSeq အပိုင်းအစ/ပြုပြင်ခြင်း/အမြီးပိုင်း Module

	ပုံ ၁။ မတူညီသော GC အချိုးများ (genomic input 10 ng, 8 cycles amplification) ဖြင့် genomic DNA ကိုစာကြည့်တိုက်ကြွယ်ဝမှုကိုထောက်ပံ့သူ K နှင့် N တို့မှဖြန်ချီ။ စာကြည့်တိုက်အထွက်နှုန်းကို Agilent မှရှာဖွေတွေ့ရှိခဲ့သည်။ ၂၁၀၀။ ရလဒ်များသည် TIANSeq HiFi Amplification Mix တွင်ကွဲပြားသော GC အကြောင်းအရာများအတွက်အားကောင်းမှုနှင့်အတူစာကြည့်တိုက်အထွက်နှုန်းမြင့်မားကြောင်းပြသခဲ့ပြီးစာကြည့်တိုက်အရည်အသွေးမြှင့်တင်မှုသည်အခြားပေးသွင်းသူများထက်သာလွန်ခဲ့သည်။
	ဒေတာအစီအစဉ်များTIANSeq HiFi Amplification Mix နှင့် HiFi enzyme ကိုအထူးသဖြင့် Supplier K နှင့် N တို့မှစာကြည့်တိုက်ချဲ့ထွင်မှုအတွက်တူညီသော genomic DNA (genome input သည် 10 ng) အတွက်သုံးသည်။ အစီအစဉ်ချပြီးနောက်စာကြည့်တိုက်၏လွှမ်းခြုံမှုနှင့်ပွားနှုန်းကိုခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာပါ။
GC ဦး စားပေး	ပုံ ၂။ TIANSeq HiFi Amplification Mix နှင့် Supplier K နှင့် N တို့မှ HIFi ကို သုံး၍ ကွဲပြားသော CG အကြောင်းအရာများနှင့်အတူဂျီနိုအာစာကြည့်တိုက်များကိုချဲ့ထွင်ခြင်းရလဒ်သည် TIANSeq HiFi Amplification Mix ချဲ့ထွင်မှုစာကြည့်တိုက်သည်ရလဒ်များနှင့်ညီမျှသော GC preference မရှိကြောင်းပြသသည်။ ကုမ္ပဏီ K နှင့်ကုမ္ပဏီ N. ထုတ်ကုန်များထက်အနည်းငယ်ပိုကောင်းသည်။ ရလဒ်များက TIANSeq HiFi Amplification Mix ချဲ့ထွင်စာကြည့်တိုက်၏လွှမ်းခြုံမှုသည်မြင့်မားသည်၊ ပွားနှုန်းသည်လိုအပ်ချက်များနှင့်စာကြည့်တိုက်၏ချဲ့ထွင်နိုင်စွမ်းသည်ပြိုင်ဘက်များနှင့်ညီမျှသည်။

Q: NGS စာကြည့်တိုက်တွင်အပိုင်းအစအရွယ်အစားများယေဘူယျအားဖြင့်ဖြန့်ဖြူးခြင်းကဘာလဲ။

လက်ရှိတွင် high-throughput sequencing နည်းပညာသည်အဓိကအားဖြင့်နောက်မျိုးဆက် sequencing နည်းပညာကိုအခြေခံသည်။ နောက်မျိုးဆက် sequencing နည်းပညာ၏စာဖတ်အရှည်သည်အကန့်အသတ်ရှိသောကြောင့်ကျွန်ုပ်တို့သည်အပိုင်းအစုံကိုစာကြည့်တိုက်ငယ်များသို့အပိုင်းလိုက်ခွဲရမည်။ ကွဲပြားသော sequencing စမ်းသပ်မှုများ၏လိုအပ်ချက်များအရကျွန်ုပ်တို့သည်များသောအားဖြင့် single-ended sequencing သို့မဟုတ် double-ended sequencing ကိုရွေးချယ်လေ့ရှိသည်။ လောလောဆယ်မျိုးဆက်သစ်စာကြည့်တိုက်၏ DNA အပိုင်းအစများကိုယေဘူယျအားဖြင့် ၂၀၀ မှ ၈၀၀ bp အတွင်းဖြန့်ဝေသည်။

မေး။ တည်ဆောက်ထားတဲ့စာကြည့်တိုက်ရဲ့ DNA စုစည်းမှုကနည်းပါတယ်။

a) DNA သည်အရည်အသွေးညံ့ဖျင်းပြီး inhibitors များပါ ၀ င်သည်။ အင်ဇိုင်းလုပ်ဆောင်မှုကိုဟန့်တားရန်အရည်အသွေးမြင့် DNA နမူနာများကိုသုံးပါ။

b) DNA စာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်ရန် PCR-free နည်းလမ်းကိုသုံးသောအခါ DNA နမူနာပမာဏမလုံလောက်ပါ။ အပိုင်းပိုင်းခွဲထားသော DNA ၏ထည့်သွင်းမှုသည် ၅၀ ng ထက်ကျော်လွန်ပါကစာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်ရေးလုပ်ငန်းစဉ်အတွင်း PCR- အခမဲ့လုပ်ငန်းစဉ်ကိုရွေးချယ်နိုင်သည်။ စာကြည့်တိုက်၏မိတ္တူအရေအတွက်သည်တိုက်ရိုက်စီစဉ်ရန်အလွန်နည်းလျှင် DNA စာကြည့်တိုက်ကို adapter ligation ပြီးနောက် PCR ဖြင့်ချဲ့နိုင်သည်။

ဂ) RNA ညစ်ညမ်းမှုသည်မတိကျသောကန ဦး DNA တွက်ချက်မှုကို ဦး တည်စေပြီး RNA ညစ်ညမ်းမှုသည် genomic DNA သန့်စင်မှုဖြစ်စဉ်တွင်တည်ရှိနိုင်ပြီး၎င်းသည်မတိကျသော DNA အရေအတွက်နှင့်စာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်မှုအတွင်းလုံလောက်သော DNA တင်ခြင်းကို ဦး တည်စေနိုင်သည်။ RNA ကိုကုသခြင်းဖြင့် RNA ကိုဖယ်ရှားနိုင်သည်။

မေး - DNA စာကြည့်တိုက်က electrophoresis ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရာမှာပုံမှန်မဟုတ်တဲ့တီးဝိုင်းတွေကိုပြခဲ့တယ်။

ဖြေ-၁

a) အသေးစားအပိုင်းအစများ (60 bp-120 bp) သေးငယ်သည့်အပိုင်းအစများသည်အများအားဖြင့် adapter များဖြင့်ဖွဲ့စည်းထားသောအပိုင်းအစများသို့မဟုတ် dimers များဖြစ်သည်။ Agencourt AMPure XP သံလိုက်ပုတီးဖြင့်သန့်စင်ခြင်းသည်ဤ adapter အပိုင်းအစများကိုထိရောက်စွာဖယ်ရှားနိုင်ပြီး sequencing အရည်အသွေးကိုသေချာစေနိုင်သည်။

b) PCR ချဲ့ထွင်မှုအပြီးတွင်စာကြည့်တိုက်၌ကြီးမားသောအပိုင်းအစများပေါ်လာပြီးစာကြည့်တိုက် DNA အပိုင်းအစ၏အရွယ်အစားသည် adapter နှင့်ပေါင်းစပ်ပြီးနောက် ၁၂၀ bp အထိမြင့်တက်လာလိမ့်မည်။ DNA အပိုင်းအစသည် adapter ligation ပြီးနောက် bp ၁၂၀ ကျော်တိုးလာလျှင်၎င်းသည်အလွန်အကျွံ PCR amplification ကိုပုံမှန်မဟုတ်သောအပိုင်းအစချဲ့ခြင်းကြောင့်ဖြစ်နိုင်သည်။ PCR စက်ဝန်းအရေအတွက်လျှော့ချခြင်းသည်အခြေအနေကိုကာကွယ်နိုင်သည်။

ဂ) adapter ligation ပြီးနောက်စာကြည့်တိုက် DNA အပိုင်းအစများ၏ပုံမှန်မဟုတ်သောအရွယ်အစားဒီ kit ရှိ adapter ၏အရှည်သည် ၆၀ bp ဖြစ်သည်။ အပိုင်းအစ၏အစွန်းနှစ်ဖက်ကို adapters များနှင့်ချိတ်သောအခါအရှည်သည် ၁၂၀ bp သာတိုးလိမ့်မည်။ ဤကိရိယာမှပေးသောအခြား adapter တစ်ခုကိုသုံးသောအခါ adapter အရှည်ကဲ့သို့သက်ဆိုင်ရာအချက်အလက်များပေးရန်အတွက်ပေးသွင်းသူအားဆက်သွယ်ပါ။ ကျေးဇူးပြု၍ လက်တွေ့စမ်းသပ်မှုလုပ်ငန်းစဉ်နှင့်လုပ်ဆောင်ချက်ကိုလက်စွဲတွင်ဖော်ပြထားသည့်အဆင့်များအတိုင်းလုပ်ဆောင်ပါ။

)) ပုံမှန်မဟုတ်သော DNA အပိုင်းအစအရွယ်အစားသည် adapter ligation မတိုင်မီဤပြသနာ၏အကြောင်းရင်းသည် DNA အကွဲကွဲအပြားပြားဖြစ်စဉ်တွင်မှားယွင်းသောတုံ့ပြန်မှုအခြေအနေများကြောင့်ဖြစ်နိုင်သည်။ မတူညီသော DNA ထည့်သွင်းမှုအတွက်ကွဲပြားသောတုံ့ပြန်မှုအချိန်ကိုသုံးသင့်သည်။ DNA ထည့်သွင်းမှုသည် ၁၀ ng ထက်ပိုပါက ၁၂ မိနစ်တုံ့ပြန်မှုအချိန်ကိုအကောင်းဆုံးဖြစ်အောင်စရန်အချိန်ကိုရွေးချယ်ရန်ကျွန်ုပ်တို့အကြံပြုသည်၊ ဤအချိန်တွင်ထုတ်လုပ်သောအပိုင်းအစသည်အဓိကအားဖြင့် ၃၀၀ မှ ၅၀၀ bp အတွင်းရှိသည်။ အသုံးပြုသူများသည်လိုအပ်သောအရွယ်အစားနှင့် DNA အပိုင်းအစများကိုပိုမိုကောင်းမွန်စေရန်၎င်းတို့၏ကိုယ်ပိုင်လိုအပ်ချက်များအရ ၂-၄ မိနစ်ကြာအောင် (သို့) လျှော့ချနိုင်သည်။

A-2

a) Fragmentation time ကို optimized မလုပ်ပါ၊ အပိုင်းအစများရဲ့ DNA သည်အလွန်သေးငယ်သည် (သို့) ကြီးလွန်းလျှင် ကျေးဇူးပြု၍ တုံ့ပြန်မှုအချိန်ကိုဆုံးဖြတ်ရန်ညွှန်ကြားချက်တွင်ပေးထားသော Fragmentation Time Selection အတွက်လမ်းညွှန်ချက်များကိုကိုးကားပါ။ အကွဲကွဲအပြားပြားဖြစ်နေချိန်ကိုပိုမိုတိကျစွာချိန်ညှိရန် ၃ မိနစ်ကြာအောင်သို့မဟုတ်တိုစေရန်တုံ့ပြန်မှုစနစ်

A-3

အကွဲကွဲအပြားပြားကုသမှုပြီးနောက် DNA ၏ပုံမှန်မဟုတ်သောအရွယ်အစားဖြန့်ဖြူးခြင်း

(က) အကွဲကွဲအပြားပြားဖြစ်စေသော reagent ၏မှားယွင်းသောအရည်ပျော်မှု (သို့) reagent သည်ပျော်ဝင်ပြီးနောက်လုံးဝရောနှောမသွားပါ။ 5 × Fragmentation Enzyme Mix reagent ကိုရေခဲတွင်ထားပါ။ အရည်ပျော်သွားလျှင်ပြွန်၏အောက်ခြေကိုညင်သာစွာပွတ်တိုက်ခြင်းဖြင့်ဆေးရည်ကိုအညီအမျှရောမွှေပါ။ reagent ကိုရေမလောင်းပါနဲ့။

ခ) DNA ထည့်သွင်းသည့်နမူနာတွင် EDTA (သို့) အခြားညစ်ညမ်းမှုများပါ ၀ င်သည်၊ DNA အသန့်စင်ခြေလှမ်းတွင်ဆားအိုင်းယွန်းများနှင့် chelating အေးဂျင့်များပါ ၀ င်သည်။ DNA ကို 1 × TE တွင်ဖျက်သိမ်းလျှင်အကွဲကွဲအပြားပြားလုပ်ဆောင်ရန်ညွှန်ကြားချက်တွင်ပါရှိသောနည်းလမ်းကိုသုံးပါ။ အဖြေ၌ EDTA အာရုံစူးစိုက်မှုမသေချာလျှင်၎င်းအား DNA ကိုသန့်စင်စေပြီးနောက်ဆက်တွဲတုံ့ပြန်မှုအတွက် deionized ရေ၌ပျော်ရန်အကြံပြုသည်။

ဂ) မတိကျသောကန ဦး DNA အရေအတွက်တွက်ချက်မှုအပိုင်းအစများ၏ DNA အရွယ်အစားသည် DNA ထည့်သွင်းမှုပမာဏနှင့်အနီးကပ်ဆက်စပ်နေသည်။ အကွဲကွဲအပြားပြားမဆက်ဆံမီတုံ့ပြန်မှုစနစ်တွင် DNA ၏အတိအကျပမာဏကိုဆုံးဖြတ်ရန် Qubit, Picogreen နှင့်အခြားနည်းလမ်းများ သုံး၍ DNA ၏တိကျသောပမာဏသည်တိကျသည်။

d) တုံ့ပြန်မှုစနစ်ပြင်ဆင်မှုသည်ညွှန်ကြားချက်ကိုမလိုက်နာပါကအစိတ်စိတ်အမွှာမွှာတုံ့ပြန်မှုစနစ်ကိုပြင်ဆင်ခြင်းသည်ညွှန်ကြားချက်များအတိုင်းတင်းကျပ်စွာဆောင်ရွက်ရမည်။ အကောင်းဆုံးအကျိုးသက်ရောက်မှုကိုသေချာစေရန်တုံ့ပြန်မှုအစိတ်အပိုင်းအားလုံးကိုရေခဲတွင်ထားသင့်ပြီးအအေးခံပြီးနောက်တုံ့ပြန်မှုစနစ်ပြင်ဆင်မှုကိုလုပ်ဆောင်သင့်သည်။ ပြင်ဆင်မှုပြီးစီးပါကနှိုက်နှိုက်ချွတ်ချွတ်ရောမွှေပေးပါ။ ရေငုပ်မနေပါနဲ့။

မေး - TIANSeq DirectFast DNA Library Kit (Illumina) အတွက်အရေးကြီးမှတ်စုများ (၄၉၉၂၂၅၉/ ၄၉၉၂၂၆၀)

၁။ မမှန်ကန်သောရောနှောနည်း (လေလှိုင်း၊ ကြမ်းတမ်းသောလှိုင်းများ၊ စသည်) သည်စာကြည့်တိုက်၏အပိုင်းအစများ (ပုံတွင်ပြထားသည့်အတိုင်း) ပုံမှန်မဟုတ်သောဖြန့်ဖြူးခြင်းကိုဖြစ်စေသည်၊ ထို့ကြောင့်စာကြည့်တိုက်၏အရည်အသွေးကိုထိခိုက်စေသည်။ ထို့ကြောင့် Fragmentation Mix တုံ့ပြန်မှုကိုပြင်ဆင်သောအခါရောမွှေရန်အပေါ်နှင့်အောက်သို့ညင်ညင်သာသာပွတ်ပေးပါ (သို့) ပွတ်သပ်ပြီးရောစပ်ရန်လက်ချောင်းထိပ်ကိုသုံးပါ။ ရေစီးနှင့်မရောရန်သတိပြုပါ။

၂။ သန့်ရှင်းစင်ကြယ်မှုမြင့်မားသော DNA ကိုစာကြည့်တိုက်ဆောက်လုပ်ရေးအတွက်သုံးရမည်

DNA ကောင်းသော DNA ခိုင်မာမှု၊ electrophoresis band သည်အမြီးမပါဘဲ ၃၀ kb ကျော်ရှိသည်

■ OD260/230:> 1.5

■ OD260/280: 1.7-1.9

၃။ DNA ထည့်သွင်းမှုပမာဏတိကျရမည်။ Nanodrop ထက် DNA ကိုတွက်ချက်ရန် Qubit နှင့် PicoGreen နည်းလမ်းများကိုသုံးရန်အကြံပြုသည်။

၄။ DNA solution တွင် EDTA ပါဝင်မှုသည် EDTA သည်အကွဲကွဲအပြားပြားတုံ့ပြန်မှုအပေါ်အလွန်သြဇာရှိသည်ဟုဆုံးဖြတ်ရမည်။ EDTA ၏အကြောင်းအရာသည်မြင့်မားပါကနောက်ဆက်တွဲစစ်ဆေးမှုမတိုင်မီ DNA သန့်စင်ခြင်းကိုလုပ်ဆောင်ရန်လိုအပ်သည်။

၅။ အကွဲကွဲအပြားပြားဖြစ်စေသောတုံ့ပြန်မှုကိုရေခဲတွင်ပြင်ဆင်ရမည်။ အကွဲကွဲအပြားပြားဖြစ်စဉ်သည်တုံ့ပြန်မှုအပူချိန်နှင့်အချိန် (အထူးသဖြင့်မြှင့်တင်စက်ထည့်ပြီးနောက်) ကိုထိခိုက်လွယ်သည်။ တုံ့ပြန်မှုအချိန်တိကျသေချာစေရန် ကျေးဇူးပြု၍ ရေခဲပေါ်တွင်တုံ့ပြန်မှုစနစ်ကိုပြင်ဆင်ပါ။

၆။ အကွဲကွဲအပြားပြားတုံ့ပြန်မှုအချိန်သည်တိကျရမည်။ အကွဲကွဲအပြားပြားခြေလှမ်း၏တုံ့ပြန်မှုသည်အပိုင်းအစထုတ်ကုန်များ၏အရွယ်အစားကိုတိုက်ရိုက်ထိခိုက်လိမ့်မည်၊ ထို့ကြောင့်စာကြည့်တိုက်ရှိ DNA အပိုင်းအစများဖြန့်ဖြူးမှုကိုထိခိုက်စေသည်။

Q: TIANSeq Fast RNA Library Kit (Illumina) အတွက်အရေးကြီးမှတ်စုများ (၄၉၉၂၃၇၅/၄၉၉၂၃၇၆)

၁။ ဤကိရိယာအတွက်နမူနာအမျိုးအစားကားအဘယ်နည်း။

ဤကိရိယာ၏သက်ဆိုင်သောနမူနာအမျိုးအစားသည်စုစုပေါင်း RNA (သို့) ကောင်းမွန်သော RNA သမာဓိနှင့်သန့်စင်သော mRNA ဖြစ်နိုင်သည်။ စာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်ရန်စုစုပေါင်း RNA ကိုသုံးလျှင် rRNA ကိုအရင်ဖယ်ရှားရန် rRNA depletion kit (Cat#4992363/4992364/4992391) ကိုသုံးရန်အကြံပြုသည်။

၂။ FFPE နမူနာများကိုဤကိရိယာဖြင့်စာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်ရန်အသုံးပြုနိုင်သလား။

FFPE နမူနာများတွင် mRNA သည်ဆွေမျိုးသားချင်းသမာဓိအားနည်းမှုနှင့်အတူအတိုင်းအတာတစ်ခုထိကျဆင်းလိမ့်မည်။ စာကြည့်တိုက်ဆောက်လုပ်ရေးအတွက်ဤကိရိယာကိုသုံးသောအခါအကွဲကွဲအပြားပြားဖြစ်စေရန်အချိန်ဖြုန်းရန် (အကွဲကွဲအပြားပြားဖြစ်အောင်အချိန်တို (သို့) အကွဲကွဲအပြားပြားဖြစ်အောင်မလုပ်ဆောင်ပါ) ။

၃။ ကုန်ပစ္စည်းလက်စွဲတွင်ဖော်ပြထားသောအရွယ်အစားရွေးချယ်ရေးအဆင့်ကိုအသုံးပြုခြင်း၊ ထည့်သွင်းထားသောအပိုင်းသည်အနည်းငယ်သွေဖည်သွားစေခြင်းငှါအဘယ်အရာဖြစ်စေသနည်း။

ဤထုတ်ကုန်လက်စွဲ၌အရွယ်အစားရွေးချယ်ခြင်းအဆင့်နှင့်အညီအရွယ်အစားရွေးချယ်ခြင်းကိုတင်းကျပ်စွာဆောင်ရွက်ရမည်။ သွေဖည်မှုရှိလျှင်အကြောင်းပြချက်မှာသံလိုက်ပုတီးများသည်အခန်းအပူချိန်နှင့်မျှတမှုမရှိခြင်း (သို့) အပြည့်အဝမရောခြင်း၊ pipette မတိကျခြင်း (သို့) အရည်သည်အစွန်အဖျား၌ကျန်နေခြင်းဖြစ်နိုင်သည်။ စမ်းသပ်မှုအတွက်စုပ်ယူမှုနည်းသောအကြံပေးချက်များကိုသုံးရန်အကြံပြုသည်။

၄။ စာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်ရာတွင် adapter များရွေးချယ်ခြင်း

စာကြည့်တိုက်ဆောက်လုပ်ရေးကိရိယာတွင် adapter reagent မပါ ၀ င်ပါ၊ ဤ kit ကို TIANSeq Single-Index Adapter (Illumina) (4992641/4992642/4992378) နှင့်တွဲသုံးရန်အကြံပြုသည်။

၅။ စာကြည့်တိုက်၏ QC

စာကြည့်တိုက်အရေအတွက်ထောက်လှမ်းခြင်း: စာကြည့်တိုက်၏အစုလိုက်အပြုံလိုက်အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့်အံသွားအာရုံစူးစိုက်မှုကိုဆုံးဖြတ်ရန်သုံးသည်။ ထုတ်ကုန်သည်လက်စွဲစာအုပ်နှင့်အညီတင်းကျပ်စွာလုပ်ဆောင်သည်။ စာကြည့်တိုက်၏အာရုံစူးစိုက်မှုသည်ယေဘူယျအားဖြင့် NGS အစီအစဉ်၏လိုအပ်ချက်များနှင့်ကိုက်ညီလိမ့်မည်။ စာကြည့်တိုက်ဖြန့်ဖြူးမှုအပိုင်းကိုရှာဖွေခြင်း၊ စာကြည့်တိုက်ဖြန့်ဖြူးခြင်းအပိုင်းကိုရှာဖွေရန် Agilent 2100 Bioanalyzer ကိုသုံးပါ။

6. အသံချဲ့စက်ဝန်းနံပါတ်ရွေးချယ်ခြင်း

ညွှန်ကြားချက်များအရ PCR စက်ဝန်းအရေအတွက်သည် ၆-၁၂ ဖြစ်ပြီးနမူနာထည့်သွင်းမှုအရလိုအပ်သော PCR စက်ဝန်းအရေအတွက်ကိုရွေးချယ်သင့်သည်။ အထွက်နှုန်းမြင့်စာကြည့်တိုက်များတွင် Agilent 2100 Bioanalyzer အားရှာဖွေခြင်း၌ပစ်မှတ်အကွာအဝေးထက်အနည်းငယ်ပိုကြီးသောအားဖြင့်၎င်းသည်ကွဲပြားသောဒီဂရီများတွင်ဖြစ်ပေါ်သည်၊ သို့မဟုတ် QPCR ၏တွေ့ရှိမှုသည် qPCR ထက်နိမ့်သည်။ အသံချဲ့စက်အသံပျော့သည်ပုံမှန်ဖြစ်စဉ်တစ်ခုဖြစ်ပြီးစာကြည့်တိုက်အစီအစဉ်များနှင့်နောက်ဆက်တွဲအချက်အလက်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကိုမထိခိုက်ပါ။

၇။ Agilent 2100 Bioanalyzer ၏ထောက်လှမ်းမှုပရိုဖိုင်းတွင်တွေ့ရပါသည်

Agilent 2100 Bioanalyzer ထောက်လှမ်းမှု၌ spikes များ၏ပုံပန်းသဏ္ဌာန်သည်မညီညာသောအကွဲကွဲအပြားပြားဖြစ်ခြင်းကြောင့်အချို့အရွယ်အစား၌အပိုင်းအစများပိုများလာပြီး၎င်းသည် PCR ကြွယ်ဝမှုပြီးနောက်ပိုမိုသိသာထင်ရှားလာလိမ့်မည်။ ဤကိစ္စတွင်၊ အရွယ်အစားရွေးချယ်ခြင်းကိုမလုပ်ဆောင်ရန်အကြံပြုသည်၊ ဆိုလိုသည်မှာအပိုင်းအစဖြန့်ဝေမှုသည်သေးငယ်ပြီးစုစည်းပြီးတစ်သားတည်းဖြစ်တည်ခြင်းကိုတိုးတက်စေနိုင်သည်။

မင်းရဲ့ message ကိုဒီမှာရေးပြီးငါတို့ဆီပို့ပါ

ထုတ်ကုန်အမျိုးအစားများ

အမေရိကန်ကိုဘာကြောင့်ရွေးတာလဲ

စတင်တည်ထောင်ကတည်းကကျွန်ုပ်တို့၏စက်ရုံသည်နိယာမကိုလိုက်နာခြင်းဖြင့်ပထမကမ္ဘာအဆင့်ထုတ်ကုန်များကိုတီထွင်ခဲ့သည်
အရည်အသွေးပထမ ကျွန်ုပ်တို့၏ထုတ်ကုန်များသည်စက်မှုလုပ်ငန်းတွင်အလွန်နာမည်ကောင်းရခဲ့ပြီးဖောက်သည်အသစ်နှင့်အဟောင်းများကြားတွင်အဖိုးတန်လက်ဖွဲ့ပစ္စည်းများဖြစ်သည်။

စုံစမ်းရန်