■မြင့်အသံချဲ့စက်ထိရောက်မှု: ကွဲပြားခြားနားသောအရွယ်အစားများ (5 kb ထက်နိမ့်သော) DNA အပိုင်းအစများနှင့်အရင်းအမြစ်များကိုထိရောက်စွာချဲ့ထွင်နိုင်သည်။
sens အာရုံခံနိုင်စွမ်းမြင့်မားခြင်း: ပစ်မှတ်အပိုင်းအစ ၁၀ ဂရမ်လောက်နိမ့်သည်နှင့်အမျှ genomic ပုံစံခွက်များမှအသံချဲ့နိုင်သည်။
stress မြင့်မားသောစိတ်ဖိစီးမှုခုခံမှု: ကြမ်းတမ်းသောထုတ်ယူထားသောပုံစံ/ဘက်တီးရီးယားယဉ်ကျေးမှုကဲ့သို့မြင့်မားသောညစ်ညမ်းမှုရှိသောတင်းပလိတ်များအတွက်ပန်းတိုင်အပိုင်းအစကိုအလွယ်တကူချဲ့နိုင်သည်။ polymerase လုပ်ဆောင်ချက်သည်ထပ်ခါတလဲလဲအေးခဲခြင်းနှင့်အရည်ပျော်ခြင်းတို့ကိုထိခိုက်လိမ့်မည်မဟုတ်ပါ။
applications လျှောက်လွှာများအတွက်အဆင်ပြေသည်။ တုံ့ပြန်မှုစနစ်ကိုလွယ်ကူလျင်မြန်စွာပြင်ဆင်ထားသည်။ တိုးချဲ့ထားသောအပိုင်းအစတွင် TA cloning အတွက်အဆင်ပြေသော 3 ′end dA-overhang ပါ ၀ င်သည်။
အမျိုးအစား: Taq DNA polymerase ဖြစ်သည်
နမူနာ: သန့်စင်ထားသော/ကြမ်းတမ်းသောထုတ်ယူထားသောပုံစံခွက်/ဘက်တီးရီးယားယဉ်ကျေးမှု
နမူနာ > ၁၀ မျက်နှာ
အပိုင်းအစအရွယ်အစား <5 kb
လျှောက်လွှာများ: PCR ၏ DNA အပိုင်းအစများ၊ DNA တံဆိပ်တပ်ခြင်း၊ primer extension၊ sequence ဆုံးဖြတ်ခြင်း၊ အကြီးစားမျိုးဗီဇထောက်လှမ်းခြင်း၊ တစ်ဝက်ပမာဏ PCR စမ်းသပ်မှုများ၊ DNA ခြေရာခံခြင်းစသည်
ထုတ်ကုန်အားလုံးသည် ODM/OEM အတွက်စိတ်ကြိုက်ပြုလုပ်နိုင်ပါသည်။ အသေးစိတ်အတွက်၊ကျေးဇူးပြုပြီး Customized Service (ODM/OEM) ကိုနှိပ်ပါ။
ပုံ ၁။ မတူညီသောကွဲပြားခြားနားသောအရင်းအမြစ်များမှပုံစံများကိုဓာတ်ကူပစ္စည်းများ၏ဖိအားခုခံမှုကိုသိရှိရန် TIANGEN Taq MasterMix II နှင့် Supplier TR မှဘုံ Taq Mix တို့ဖြင့်ချဲ့ထားသည်။ ရလဒ်များအရ TIANGEN ထုတ်ကုန်များသည်ကြမ်းတမ်းသောမျိုးရိုးဗီဇပုံစံများနှင့်ဘက်တီးရီးယားယဉ်ကျေးမှုများမှပစ်မှတ်အပိုင်းအစများကိုချဲ့ထွင်နိုင်ပြီးဖိစီးမှုခံနိုင်ရည်သည်ပေးသွင်းသူ TR ထက်ပိုကောင်းသည်။ A: TIANGEN TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit မှထုတ်ယူထားသောကြမ်းတမ်းသော genomic ပုံစံ Prp/DN: အရိုင်းများထုတ်ယူခြင်းနှင့်လူ့သွေးနမူနာများရှာဖွေခြင်း ဆန်: ဆန်ကြမ်းနမူနာများထုတ်ယူခြင်းနှင့်စစ်ဆေးခြင်း B: ကိုလိုနီ PCR PCR အပိုင်းအစသည် ၇၀၀ bp ဖြစ်သည်။ M: TIANGEN Marker III |
|
ကွဲပြားခြားနားသောအရင်းအမြစ်များနှင့်ကွဲပြားခြားနားသောအရှည်များနှင့်ပုံစံခွက်များအတွက်ကောင်းမွန်မှု ပုံ ၂။ မတူညီသောရင်းမြစ်များနှင့်အလျားအပိုင်းအစများကို TIANGEN ကို သုံး၍ ချဲ့ထွင်ခဲ့သည် တက်ခ် MasterMix II (A) နှင့်သာမန် တက်ခ် Supplier TK (B), Supplier TR (C), Supplier V (D) နှင့် Supplier G (E) အသီးသီးတို့ရောနှောနေသည်။ ရလဒ်များသည် TIANGEN ထုတ်ကုန်များ၏ပြည့်စုံသောစွမ်းဆောင်ရည်သည်ချဲ့ထွင်နိုင်စွမ်း၊ တိကျမှုနှင့်တစ်ကမ္ဘာလုံးအတိုင်းအတာအရအကောင်းဆုံးဖြစ်ကြောင်း M: TIANGEN Marker III1: ပဲပုပ်မျိုးရိုးဗီဇ DNA ပုံစံ (၁၂၀ bp)၊ ၂-၃: ဆန်မျိုးရိုးဗီဇ DNA ပုံစံ (၆၉၄ bp၊ ၂၂၅၈ bp); ၄: ချည်မျိုးရိုးဗီဇ DNA ပုံစံ (၂၀၀ bp) ၅: Escherichia coli တို့ဖြစ်တယ် မျိုးရိုးဗီဇ DNA ပုံစံ (၂၂၉၈ bp)၊ ၆-၇: Mouse genome DNA template (1 kb, 2 kb); ၈-၁၀: ကြွက်မျိုးရိုးဗီဇ DNA ပုံစံခွက် (1 kb, 2 kb, 2080 bp); ၁၁-၁၈-လူသားမျိုးရိုးဗီဇ DNA ပုံစံ (၃၀၀ bp၊ ၄၄၈ bp (GC%: ၇၄.၈%)၊ ၁၁၀၀ bp၊ ၇၅၀ bp 1000 bp, 1090 bp (GC%: 70.4%), 2 kb, 4 kb) |
|
မြင့်မားသော sensitivity ကို ပုံ ၃။ ကြွက်နှင့်လူသား၏ DNA အပိုင်းအစများကို TIANGEN ကို သုံး၍ ကွဲပြားသွားသည် တက်ခ် MasterMix II (A)၊ သာမန် တက်ခ် amplification sensitivity ကိုသိရှိရန် Supplier V (B) နှင့် Supplier TK (C) တို့ရောနှောပါ။ ရလဒ်များအရ TIANGEN ထုတ်ကုန်သည် genome ပုံစံခွက်မှ 0.01 ng အထိနိမ့်သည်နှင့်၎င်း၏အာရုံခံနိုင်စွမ်းသည် Supplier V နှင့် TK.M: TIANGEN Marker III, N: NT : 200 ng, 100 ng, 50 ng, 20 ng, 10 ng, 1 ng, 0.1 ng, 0.01 ng |
A-1 Template
template ပုံစံတွင်ပရိုတင်းအညစ်အကြေးများ (သို့) Taq inhibitors များပါ ၀ င်သည်။
template ပုံစံခွက်၏ denaturation သည်မပြည့်စုံပါ - denaturation temperature ကိုသင့်လျော်စွာတိုးမြှင့်ပေးပြီး denaturation အချိန်ကိုရှည်စေသည်။
■ပုံစံခွက်ပျက်စီးခြင်း —— ပုံစံခွက်ကိုပြန်လည်ပြင်ဆင်ပါ။
A-2 Primer ပါ
ers primer များ၏အရည်အသွေးညံ့ဖျင်းခြင်း-primer ကိုပြန်လည်ပေါင်းစပ်ခြင်း
er Primer ပျက်စီးခြင်း —— ထိန်းသိမ်းမှုအတွက် high concentration primers များကိုအသေးငယ်ဆုံးဖြစ်အောင်စုဆောင်းပါ။ အအေးခဲခြင်း၊ အရည်ပျော်ခြင်း (သို့) ၄ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်ရေရှည်သိုလှောင်ခြင်းကိုရှောင်ကြဉ်ပါ။
ers primer များ၏မမှန်ကန်သောဒီဇိုင်း (ဥပမာ primer အရှည်မလုံလောက်ခြင်း၊ primer များအကြား dimer ဖွဲ့ခြင်း၊ )
A-3 Mg၂+အာရုံစူးစိုက်မှု
မောင်မောင်၂+ အာရုံစူးစိုက်မှုအလွန်နည်းသည် - Mg ကိုမှန်ကန်စွာတိုးမြှင့်ပါ၂+ အာရုံစူးစိုက်မှု: Mg ကိုပိုကောင်းအောင်လုပ်ပါ၂+ အကောင်းဆုံး Mg ကိုဆုံးဖြတ်ရန် ၁ မီလီမီတာမှ ၃ မီတာအထိတုံ့ပြန်မှုများဆက်တိုက်ပြုလုပ်ပြီးအာရုံစူးစိုက်မှုကိုအာရုံစူးစိုက်မှု၂+ ပုံစံတစ်ခုနှင့် primer တစ်ခုစီအတွက်အာရုံစူးစိုက်မှု
A-4 Annealing အပူချိန်
an မြင့်မားသောမီးခံအပူချိန်သည် primer နှင့် template ၏စည်းနှောင်အားကိုသက်ရောက်မှုရှိသည်။ —— မီးလောင်ကျွမ်းထားသောအပူချိန်ကိုလျှော့ချပြီး ၂ ဒီဂရီဆဲလ်စီးယပ်စ်ဖြင့်အခြေအနေကိုပိုကောင်းအောင်လုပ်ပါ။
A-5 Extension အချိန်
extension တိုတောင်းသောတိုးချဲ့အချိန် —— တိုးချဲ့မှုအချိန်ကိုတိုးပါ။
Phenomena: အနုတ်လက္ခဏာနမူနာများသည်ပစ်မှတ်အစဉ်လိုက်တီးဝိုင်းများကိုလည်းပြသည်။
PCR ၏ A-1 ညစ်ညမ်းမှု
target ပစ်မှတ်ဆင့်ပွားခြင်း (သို့) ချဲ့ထွင်ထားသောထုတ်ကုန်များ၏ညစ်ညမ်းမှုကိုဖြတ်ပါ၊ အနုတ်လက္ခဏာနမူနာတွင် ဦး တည်ချက်ပါ ၀ င်သောနမူနာကိုပိုက်ဖြင့်မပစ်ပါနှင့်၊ centrifuge ပြွန်မှယိုစေပါ။ ဓာတ်ကူပစ္စည်းများသို့မဟုတ်ကိရိယာများသည်ရှိပြီးသား nucleic အက်ဆစ်များကိုဖယ်ရှားရန် autoclaved ဖြစ်သင့်ပြီးညစ်ညမ်းမှုတည်ရှိမှုကိုအနုတ်လက္ခဏာထိန်းချုပ်မှုစမ်းသပ်မှုများဖြင့်ဆုံးဖြတ်သင့်သည်။
■ Reagent ညစ်ညမ်းမှု - ဓာတ်ကူပစ္စည်းများကိုစုဆောင်းပြီးအပူချိန်နိမ့်သောနေရာတွင်ထားပါ။
A-2 Primer
မောင်မောင်၂+ အာရုံစူးစိုက်မှုအလွန်နည်းသည် - Mg ကိုမှန်ကန်စွာတိုးမြှင့်ပါ၂+ အာရုံစူးစိုက်မှု: Mg ကိုပိုကောင်းအောင်လုပ်ပါ၂+ အကောင်းဆုံး Mg ကိုဆုံးဖြတ်ရန် ၁ မီလီမီတာမှ ၃ မီတာအထိတုံ့ပြန်မှုများဆက်တိုက်ပြုလုပ်ပြီးအာရုံစူးစိုက်မှုကိုအာရုံစူးစိုက်မှု၂+ ပုံစံတစ်ခုနှင့် primer တစ်ခုစီအတွက်အာရုံစူးစိုက်မှု
ro မမှန်ကန်သော primer ဒီဇိုင်း၊ ပစ်မှတ်အစီအစဉ်သည်ပန်းတိုင်မဟုတ်သောအစီအစဉ်နှင့်တူညီသည်။ --- ပြန်လည်ဒီဇိုင်းဒီဇိုင်းများ
ဖြစ်ရပ်များ: PCR အသံချဲ့စက်များသည်မျှော်မှန်းထားသောအရွယ်အစားနှင့်ကြီးကြီးမားမား၊ သေးငယ်သည်ဖြစ်စေ၊ တစ်ခါတစ်ရံတွင်သီးခြားအသံချဲ့ခွင်များနှင့်မတိကျသောအသံချဲ့ခွင်များဖြစ်ပေါ်သည်။
A-1 Primer ဖြစ်သည်
prim primer တိကျမှုအားနည်းသည်
--- ပြန်လည်ဒီဇိုင်း primer
prim primer အာရုံစူးစိုက်မှုအလွန်မြင့်မားသည် - denaturation temperature ကိုမှန်မှန်ကန်ကန်မြင့်တက်စေပြီး denaturation ကြာရှည်စေသည်။
A-2 Mg၂+ အာရုံစူးစိုက်မှု
မောင်၂+ အာရုံစူးစိုက်မှုမြင့်လွန်းသည် - Mg2+ အာရုံစူးစိုက်မှုကိုမှန်ကန်စွာလျှော့ချပါ၊ Mg ကိုပိုကောင်းအောင်လုပ်ပါ၂+ အကောင်းဆုံး Mg ကိုဆုံးဖြတ်ရန် ၁ မီလီမီတာမှ ၃ မီတာအထိတုံ့ပြန်မှုများဆက်တိုက်ပြုလုပ်ပြီးအာရုံစူးစိုက်မှုကိုအာရုံစူးစိုက်မှု၂+ ပုံစံတစ်ခုနှင့် primer တစ်ခုစီအတွက်အာရုံစူးစိုက်မှု
A-3 အပူထိန်းနိုင်သော polymerase
enzy အလွန်အကျွံအင်ဇိုင်းပမာဏ — 0.5 ၀.၅ ယူနစ်ကြားတွင်သင့်တော်သောအင်ဇိုင်းပမာဏကိုသင့်တော်စွာလျှော့ချပါ။
A-4 Annealing အပူချိန်
ne မီးခံအပူချိန်သည်နိမ့်လွန်းသည်-သင့်လျော်သော annealing အပူချိန်ကိုသင့်လျော်စွာတိုးမြှင့်ခြင်း (သို့) အဆင့်နှစ်ဆင့်ခွဲခြင်းနည်းလမ်းကိုသုံးပါ။
A-5 PCR ဟုတ်ရဲ့လား
PC PCR သံသရာများလွန်းခြင်း - PCR စက်ဝန်းအရေအတွက်ကိုလျှော့ချပါ။
A-1 Primer ဖြစ်သည်—- ပိုဆိုးသောထူးခြားမှု —— primer ကိုပြန်လည်ဒီဇိုင်းဆွဲပါ၊ primer ၏အနေအထားနှင့်အရှည်ကိုပြောင်းပါ။ သို့မဟုတ် nested PCR လုပ်ဆောင်ပါ။
A-2 Template သည် DNA ဖြစ်သည်
—— ပုံစံခွက်သည်မသန့်ရှင်းပါ —— ပုံစံခွက်ကိုသန့်စင်ပါ၊ သို့မဟုတ်သန့်ရှင်းသောဆေးသေတ္တာများဖြင့် DNA ကိုထုတ်ယူပါ။
A-3 Mg၂+ အာရုံစူးစိုက်မှု
--- မောင်၂+ အာရုံစူးစိုက်မှုအလွန်မြင့်မားသည် - Mg ကိုမှန်ကန်စွာလျှော့ချပါ၂+ အာရုံစူးစိုက်မှု: Mg ကိုပိုကောင်းအောင်လုပ်ပါ၂+ အကောင်းဆုံး Mg ကိုဆုံးဖြတ်ရန် ၁ မီလီမီတာမှ ၃ မီတာအထိတုံ့ပြန်မှုများဆက်တိုက်ပြုလုပ်ပြီးအာရုံစူးစိုက်မှုကိုအာရုံစူးစိုက်မှု၂+ ပုံစံတစ်ခုနှင့် primer တစ်ခုစီအတွက်အာရုံစူးစိုက်မှု
A-4 dNTP
—— dNTP ၏အာရုံစူးစိုက်မှုမြင့်လွန်းသည် —— dNTP ၏အာရုံစူးစိုက်မှုကိုသင့်လျော်စွာလျှော့ချပါ
A-5 Annealing အပူချိန်
—— အလွန်နည်းသော annealing အပူချိန် —— သင့်လျော်သော annealing အပူချိန်ကိုသင့်လျော်စွာတိုးမြှင့်ပါ
A-6 Cycles
—— သံသရာအလွန်များ —— စက်ဝန်းနံပါတ်ကိုပိုကောင်းအောင်လုပ်ပါ
ပထမအဆင့်သည်သင့်တော်သော polymerase ကိုရွေးချယ်ရန်ဖြစ်သည်။ ပုံမှန် Taq polymerase သည် 3'-5 'exonuclease လုပ်ဆောင်ချက်မရှိခြင်းကြောင့်စာပြန်စစ်။ မရပါကမကိုက်ညီလျှင်အပိုင်းအစများ၏တိုးချဲ့မှုထိရောက်မှုကိုများစွာလျော့ကျစေသည်။ ထို့ကြောင့်ပုံမှန် Taq polymerase သည် 5 kb ထက်ကြီးသောပစ်မှတ်အပိုင်းအစများကိုထိထိရောက်ရောက်မချဲ့နိုင်ပါ။ Taq polymerase ကိုအထူးပြုပြင်မွမ်းမံခြင်းသို့မဟုတ်အခြားမြင့်မားသောသစ္စာရှိမှု polymerase တို့ဖြင့် extension efficiency ကိုမြှင့်တင်ရန်နှင့်ရှည်လျားသောအပိုင်းအစချဲ့ထွင်မှုလိုအပ်ချက်များကိုဖြည့်ဆည်းရန်ရွေးချယ်သင့်သည်။ ထို့အပြင်အပိုင်းအစရှည်များချဲ့ခြင်းသည် primer ဒီဇိုင်း၊ denaturation time၊ extension time၊ buffer pH စသည်ဖြင့်လိုက်လျောညီထွေဖြစ်အောင်ညှိရန်လိုအပ်သည်။ အများအားဖြင့် 18-24 bp ပါသော primers များသည်အထွက်နှုန်းပိုကောင်းစေနိုင်သည်။ ပုံစံခွက်ပျက်စီးမှုကိုကာကွယ်ရန် ၉၄ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင် denaturation time ကိုတစ်စက္ကန့် ၃၀ သို့လျှော့ချရန်နှင့်အသံချဲ့စက်မတိုင်မီအပူချိန် ၉၄ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်သို့ ၁ မိနစ်ထက်နည်းသင့်သည်။ ၎င်းအပြင်တိုးချဲ့အပူချိန်ကို ၆၈ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်ခန့်တွင်သတ်မှတ်ပေးပြီးတိုးချဲ့ချိန်ကို ၁ kb/min နှုန်းအတိုင်းဒီဇိုင်းဆွဲခြင်းဖြင့်ရှည်လျားသောအပိုင်းအစများကိုထိရောက်စွာချဲ့ထွင်နိုင်သည်။
PCR အသံချဲ့စက်၏အမှားနှုန်းကိုမြင့်မားသောတည်ကြည်မှုနှင့်အတူအမျိုးမျိုးသော DNA polymerases များကို သုံး၍ လျှော့ချနိုင်သည်။ ယခုအချိန်ထိ Taq DNA polymerases များအားလုံးတွင် Pfu အင်ဇိုင်းသည်အနိမ့်ဆုံးအမှားနှုန်းနှင့်အမြင့်ဆုံးသစ္စာရှိမှု (ပူးတွဲဇယားတွင်ကြည့်ပါ) ။ အင်ဇိုင်းရွေးချယ်မှုအပြင်သုတေသီများသည်ကြားခံဖွဲ့စည်းမှုကိုတိုးတက်စေခြင်း၊ အပူထိန်းနိုင်သော polymerase ၏အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့် PCR စက်ဝန်းအရေအတွက်ပိုမိုကောင်းမွန်စေခြင်းအပါအ ၀ င်တုံ့ပြန်မှုအခြေအနေများကိုပိုမိုကောင်းမွန်စေခြင်းဖြင့်ပိုမိုလျှော့ချနိုင်သည်။
စတင်တည်ထောင်ကတည်းကကျွန်ုပ်တို့၏စက်ရုံသည်နိယာမကိုလိုက်နာခြင်းဖြင့်ပထမကမ္ဘာအဆင့်ထုတ်ကုန်များကိုတီထွင်ခဲ့သည်
အရည်အသွေးပထမ ကျွန်ုပ်တို့၏ထုတ်ကုန်များသည်စက်မှုလုပ်ငန်းတွင်အလွန်နာမည်ကောင်းရခဲ့ပြီးဖောက်သည်အသစ်နှင့်အဟောင်းများကြားတွင်အဖိုးတန်လက်ဖွဲ့ပစ္စည်းများဖြစ်သည်။