TIANSeq DirectFast စာကြည့်တိုက်ကိရိယာ (illumina)

မျိုးဆက်သစ် DNA စာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်မှုနည်းပညာသည်အကွဲကွဲအပြားပြားမဖြစ်စေဘဲကြိုတင်ပြုပြင်ခြင်း

TIANSeq DirectFast Library Kit (illumina) သည် illumina sequencing platform အတွက် DNA စာကြည့်တိုက်ပြင်ဆင်မှုအစုံဖြစ်သည်။ အစုံသည်သန့်စင်မှုအဆင့်များစွာမလိုအပ်သည့်အဆင့်တစ်ခုတုံ့ပြန်မှုဖြစ်စဉ်ကိုလက်ခံသည်။ DNA အကွဲကွဲအပြားပြား၊ အဆုံးသတ်ပြုပြင်ခြင်းနှင့် dA-tailing တို့ကိုပြွန်တစ်ခု၏ enzymatic တုံ့ပြန်မှုတွင်လုပ်ဆောင်နိုင်သည်။ ကိရိယာအစုံမှပေးအပ်သော PCR အသံချဲ့စက်သည်အထူးသဖြင့်ပိုမိုကောင်းမွန်စေ။ အသံချဲ့စက်မှရရှိသော DNA sequence ကိုမြင့်မားသောအထွက်နှုန်း၊ ကောင်းသောသစ္စာရှိမှုနှင့်အခြေခံဘက်လိုက်မှုမရှိစေရန်အထူးကောင်းမွန်အောင်ပြုလုပ်ထားသည်။

ကြောင်။ မဟုတ်ဘူး ထုပ်ပိုးမှုအရွယ်အစား
4992259 ၂၄ rxn
4992260 ၉၆ rxn

ကုန်ပစ္စည်းအသေးစိတ်

လုပ်ငန်းအသွားအလာ

စမ်းသပ်ဥပမာ

အမြဲမေးလေ့ရှိသောမေးခွန်းများ

ကုန်ပစ္စည်းတံဆိပ်များ

အင်္ဂါရပ်များ

■ကောင်းမွန်သောအစီအစဉ်တူညီမှု: DNA ခွဲခြမ်းခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်နှင့် PCR ချဲ့ထွင်ခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်၏အခြေခံဘက်လိုက်မှုမရှိပါ။
library မြင့်စာကြည့်တိုက်ပြောင်းလဲခြင်းထိရောက်မှု
■လျင်မြန်သောလုပ်ဆောင်ချက် - စာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်မှုလုပ်ငန်းစဉ်တစ်ခုလုံးသည် ၂.၅ နာရီသာလိုသည်။
■ကုန်ကျစရိတ်သက်သာ။ အထူးတူရိယာများနှင့်ကိရိယာများမလိုအပ်ပါ။

သတ်မှတ်ချက်

အမျိုးအစား: illumina high-throughput sequencing ပလက်ဖောင်းအတွက် DNA စာကြည့်တိုက်ပြင်ဆင်ခြင်း
နမူနာ: Genomic DNA (သို့) ကြီးမားသောအပိုင်းအစ DNA
ပစ်မှတ် နှစ်ထပ်သောင်တင်နေသော DNA
နမူနာထည့်သွင်းမှုစတင်ခြင်း 1 ng- 1 μg
စစ်ဆင်ရေးအချိန်: ၂.၅ နာရီ
အစပိုင်း applications များ: illumina ပလက်ဖောင်းတွင်အစီအစဉ်

ထုတ်ကုန်အားလုံးသည် ODM/OEM အတွက်စိတ်ကြိုက်ပြုလုပ်နိုင်ပါသည်။ အသေးစိတ်အတွက်၊ကျေးဇူးပြုပြီး Customized Service (ODM/OEM) ကိုနှိပ်ပါ။


  • ယခင်:
  • နောက်တစ်ခု:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×

    Workflow Workflow

    ပြောင်းလွယ်ပြင်လွယ်နမူနာထည့်သွင်းမှုနှင့်အစိတ်စိတ်အမွှာမွှာအရွယ်အစားFlexible sample input and fragmented size ပုံ ၁။ မတူညီတဲ့တုံ့ပြန်မှုအချိန်ရဲ့ DNA အကွဲကွဲအပြားပြားပုံတွေကို 10 ng နှင့် 1000 ng DNA တို့ကို TIANSeq DirectFast DNA Library Kit သုံး၍ အပိုင်းပိုင်းခွဲထားသည်။ ကွဲပြားခြားနားသောတုံ့ပြန်မှုအချိန်ဖြင့်ကုသသောတုံ့ပြန်မှုများကို 1.8 × Ampure XP သံလိုက်ပုတီးဖြင့်သန့်စင်ပြီး Angilent 2100 မှခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာသည်။
    Covaris ကဲ့သို့ Sequencing CoverageCovaris-Like Sequencing Coverage ပုံ ၂။ ကွဲပြားသောစာကြည့်တိုက်ပြင်ဆင်မှုနည်းလမ်းများ၏ဂျီနိုအာလွှမ်းခြုံမှုနှိုင်းယှဉ်ချက်။ ကွဲပြားခြားနားသော GC ပါဝင်သောဘက်တီးရီးယားမျိုးရိုးဗီဇ DNA ၃ ခုသည်ရောနှောညီမျှခြင်းဖြစ်ပြီး၊ ဤနည်းလမ်းများကို သုံး၍ ရောစပ်ထားသော DNA စာကြည့်တိုက် ၁၀၀ ng ၏ genome လွှမ်းခြုံမှုအစီအစဉ်ကိုနှိုင်းယှဉ်ခဲ့သည်။ ရလဒ်များအရ TIANSeq DirectFast စာကြည့်တိုက် Kit သည် DNA ဖြတ်တောက်ခြင်းကိုစက်ဖြတ်တောက်ခြင်းကဲ့သို့တူညီသောအကျိုးသက်ရောက်မှုရှိပြီးအကွဲကွဲအပြားပြားဖြစ်စေရန်အခြေခံဘက်လိုက်မှုမရှိကြောင်းပြသသည်။
    1 ng ထည့်သွင်းသည့် DNA သည်နိမ့်ကျသောအတွက်စနစ်ကျသောအရာမရှိပါNo Systematic Bias for As Low As 1 ng Input DNA ပုံ ၃။ ကွဲပြားသောစာကြည့်တိုက်ပြင်ဆင်မှုနည်းလမ်းများ၏ဂျီနိုအာလွှမ်းခြုံမှုနှိုင်းယှဉ်ချက်။ ကွဲပြားခြားနားသော GC ပါဝင်သောဘက်တီးရီးယားမျိုးရိုးဗီဇ DNA ၃ ခုသည်ရောနှောညီမျှခြင်းဖြစ်ပြီး၊ ဤနည်းလမ်းများကို သုံး၍ ရောစပ်ထားသော DNA စာကြည့်တိုက်များ 1 ng ၏ genome လွှမ်းခြုံမှုအစီအစဉ်ကိုနှိုင်းယှဉ်ခဲ့သည်။ ရလဒ်များအရ TIANSeq DirectFast စာကြည့်တိုက် Kit သည် ၁ ng အထိနိမ့်သောတောင်မှ DNA ထည့်သွင်းမှုအတွက်စက်ဖြတ်တောက်ခြင်းနှင့်တသမတ်တည်းအကွဲကွဲအပြားပြားအကျိုးသက်ရောက်မှုရှိသည်။
    PCR-Free Workflow ကိုလုပ်ဆောင်နိုင်စွမ်းရှိသည်

    Capable of PCR-Free Workflow

    ပုံ ၄။ မျိုးရိုးဗီဇ DNA ကိုမတူညီတဲ့ထည့်သွင်းမှုတွေကိုစာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်ဖို့အတွက် PCR (သို့) PCR- အခမဲ့စာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်ပြီး genome လွှမ်းခြုံမှုရလဒ်တွေနဲ့နှိုင်းယှဉ်ခဲ့တယ်။ ရလဒ်များအရ one-tube လည်ပတ်မှုနှင့်အကျိုးရှိစာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်မှုအဆင့်များနှင့်အတူ TIANSeq DirectFast Library Kit နှင့်တည်ဆောက်ခဲ့သော DNA စာကြည့်တိုက်သည် PCR မွမ်းမံ PCR- အခမဲ့လုပ်ငန်းစဉ်နှစ်ခုလုံးအတွက်စက်ညှပ်ခြင်းနှင့်အတူမြင့်မားသောလိုက်လျောညီထွေမှုကိုထိန်းသိမ်းပေးသည်။
     စာကြည့်တိုက်ဆောက်လုပ်မှုထိရောက်မှုနှင့်အထွက်နှုန်းStatistics of Library Construction Efficiency and Yield ပုံ ၅။ ကွဲပြားသောစတင်ပမာဏများ (ဥပမာ ၁၊ ၁၀၊ ၂၅၊ ၅၀၊ ၁၀၀၊ ၅၀၀၊ ၁၀၀၀ ng) ဖြင့်စာကြည့်တိုက်များတည်ဆောက်ပြီးနောက် qPCR မှရရှိသောစာကြည့်တိုက် DNA ၏ရလဒ်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းရလဒ်များ linear regression ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းသည်စာကြည့်တိုက်အထွက်နှုန်းသည်ကျယ်ပြန့်သောနမူနာ input range တွင်ကောင်းမွန်သော linear relationship ရှိသည်။ DNA ထည့်သွင်းမှုသည် ၁ ng အထိနိမ့်သဖြင့်စာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်မှု၏ထိရောက်မှုသည်မကျဆင်းပါ။

    ကွဲပြားခြားနားသောထုတ်ကုန်များ၏အစီအစဉ်အလိုက်အချက်အလက်နှိုင်းယှဉ်ခြင်း

    Comparison of Sequencing Data of Different Products

    Q: NGS စာကြည့်တိုက်တွင်အပိုင်းအစအရွယ်အစားများယေဘူယျအားဖြင့်ဖြန့်ဖြူးခြင်းကဘာလဲ။

    လက်ရှိတွင် high-throughput sequencing နည်းပညာသည်အဓိကအားဖြင့်နောက်မျိုးဆက် sequencing နည်းပညာကိုအခြေခံသည်။ နောက်မျိုးဆက် sequencing နည်းပညာ၏စာဖတ်အရှည်သည်အကန့်အသတ်ရှိသောကြောင့်ကျွန်ုပ်တို့သည်အပိုင်းအစုံကိုစာကြည့်တိုက်ငယ်များသို့အပိုင်းလိုက်ခွဲရမည်။ ကွဲပြားသော sequencing စမ်းသပ်မှုများ၏လိုအပ်ချက်များအရကျွန်ုပ်တို့သည်များသောအားဖြင့် single-ended sequencing သို့မဟုတ် double-ended sequencing ကိုရွေးချယ်လေ့ရှိသည်။ လောလောဆယ်မျိုးဆက်သစ်စာကြည့်တိုက်၏ DNA အပိုင်းအစများကိုယေဘူယျအားဖြင့် ၂၀၀ မှ ၈၀၀ bp အတွင်းဖြန့်ဝေသည်။

    excel
    မေး။ တည်ဆောက်ထားတဲ့စာကြည့်တိုက်ရဲ့ DNA စုစည်းမှုကနည်းပါတယ်။

    a) DNA သည်အရည်အသွေးညံ့ဖျင်းပြီး inhibitors များပါ ၀ င်သည်။ အင်ဇိုင်းလုပ်ဆောင်မှုကိုဟန့်တားရန်အရည်အသွေးမြင့် DNA နမူနာများကိုသုံးပါ။

    b) DNA စာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်ရန် PCR-free နည်းလမ်းကိုသုံးသောအခါ DNA နမူနာပမာဏမလုံလောက်ပါ။ အပိုင်းပိုင်းခွဲထားသော DNA ၏ထည့်သွင်းမှုသည် ၅၀ ng ထက်ကျော်လွန်ပါကစာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်ရေးလုပ်ငန်းစဉ်အတွင်း PCR- အခမဲ့လုပ်ငန်းစဉ်ကိုရွေးချယ်နိုင်သည်။ စာကြည့်တိုက်၏မိတ္တူအရေအတွက်သည်တိုက်ရိုက်စီစဉ်ရန်အလွန်နည်းလျှင် DNA စာကြည့်တိုက်ကို adapter ligation ပြီးနောက် PCR ဖြင့်ချဲ့နိုင်သည်။

    ဂ) RNA ညစ်ညမ်းမှုသည်မတိကျသောကန ဦး DNA တွက်ချက်မှုကို ဦး တည်စေပြီး RNA ညစ်ညမ်းမှုသည် genomic DNA သန့်စင်မှုဖြစ်စဉ်တွင်တည်ရှိနိုင်ပြီး၎င်းသည်မတိကျသော DNA အရေအတွက်နှင့်စာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်မှုအတွင်းလုံလောက်သော DNA တင်ခြင်းကို ဦး တည်စေနိုင်သည်။ RNA ကိုကုသခြင်းဖြင့် RNA ကိုဖယ်ရှားနိုင်သည်။

    မေး - DNA စာကြည့်တိုက်က electrophoresis ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရာမှာပုံမှန်မဟုတ်တဲ့တီးဝိုင်းတွေကိုပြခဲ့တယ်။

    ဖြေ-၁

    a) အသေးစားအပိုင်းအစများ (60 bp-120 bp) သေးငယ်သည့်အပိုင်းအစများသည်အများအားဖြင့် adapter များဖြင့်ဖွဲ့စည်းထားသောအပိုင်းအစများသို့မဟုတ် dimers များဖြစ်သည်။ Agencourt AMPure XP သံလိုက်ပုတီးဖြင့်သန့်စင်ခြင်းသည်ဤ adapter အပိုင်းအစများကိုထိရောက်စွာဖယ်ရှားနိုင်ပြီး sequencing အရည်အသွေးကိုသေချာစေနိုင်သည်။

    b) PCR ချဲ့ထွင်မှုအပြီးတွင်စာကြည့်တိုက်၌ကြီးမားသောအပိုင်းအစများပေါ်လာပြီးစာကြည့်တိုက် DNA အပိုင်းအစ၏အရွယ်အစားသည် adapter နှင့်ပေါင်းစပ်ပြီးနောက် ၁၂၀ bp အထိမြင့်တက်လာလိမ့်မည်။ DNA အပိုင်းအစသည် adapter ligation ပြီးနောက် bp ၁၂၀ ကျော်တိုးလာလျှင်၎င်းသည်အလွန်အကျွံ PCR amplification ကိုပုံမှန်မဟုတ်သောအပိုင်းအစချဲ့ခြင်းကြောင့်ဖြစ်နိုင်သည်။ PCR စက်ဝန်းအရေအတွက်လျှော့ချခြင်းသည်အခြေအနေကိုကာကွယ်နိုင်သည်။

    ဂ) adapter ligation ပြီးနောက်စာကြည့်တိုက် DNA အပိုင်းအစများ၏ပုံမှန်မဟုတ်သောအရွယ်အစားဒီ kit ရှိ adapter ၏အရှည်သည် ၆၀ bp ဖြစ်သည်။ အပိုင်းအစ၏အစွန်းနှစ်ဖက်ကို adapters များနှင့်ချိတ်သောအခါအရှည်သည် ၁၂၀ bp သာတိုးလိမ့်မည်။ ဤကိရိယာမှပေးသောအခြား adapter တစ်ခုကိုသုံးသောအခါ adapter အရှည်ကဲ့သို့သက်ဆိုင်ရာအချက်အလက်များပေးရန်အတွက်ပေးသွင်းသူအားဆက်သွယ်ပါ။ ကျေးဇူးပြု၍ လက်တွေ့စမ်းသပ်မှုလုပ်ငန်းစဉ်နှင့်လုပ်ဆောင်ချက်ကိုလက်စွဲတွင်ဖော်ပြထားသည့်အဆင့်များအတိုင်းလုပ်ဆောင်ပါ။

    )) ပုံမှန်မဟုတ်သော DNA အပိုင်းအစအရွယ်အစားသည် adapter ligation မတိုင်မီဤပြသနာ၏အကြောင်းရင်းသည် DNA အကွဲကွဲအပြားပြားဖြစ်စဉ်တွင်မှားယွင်းသောတုံ့ပြန်မှုအခြေအနေများကြောင့်ဖြစ်နိုင်သည်။ မတူညီသော DNA ထည့်သွင်းမှုအတွက်ကွဲပြားသောတုံ့ပြန်မှုအချိန်ကိုသုံးသင့်သည်။ DNA ထည့်သွင်းမှုသည် ၁၀ ng ထက်ပိုပါက ၁၂ မိနစ်တုံ့ပြန်မှုအချိန်ကိုအကောင်းဆုံးဖြစ်အောင်စရန်အချိန်ကိုရွေးချယ်ရန်ကျွန်ုပ်တို့အကြံပြုသည်၊ ဤအချိန်တွင်ထုတ်လုပ်သောအပိုင်းအစသည်အဓိကအားဖြင့် ၃၀၀ မှ ၅၀၀ bp အတွင်းရှိသည်။ အသုံးပြုသူများသည်လိုအပ်သောအရွယ်အစားနှင့် DNA အပိုင်းအစများကိုပိုမိုကောင်းမွန်စေရန်၎င်းတို့၏ကိုယ်ပိုင်လိုအပ်ချက်များအရ ၂-၄ မိနစ်ကြာအောင် (သို့) လျှော့ချနိုင်သည်။

    A-2

    a) Fragmentation time ကို optimized မလုပ်ပါ၊ အပိုင်းအစများရဲ့ DNA သည်အလွန်သေးငယ်သည် (သို့) ကြီးလွန်းလျှင် ကျေးဇူးပြု၍ တုံ့ပြန်မှုအချိန်ကိုဆုံးဖြတ်ရန်ညွှန်ကြားချက်တွင်ပေးထားသော Fragmentation Time Selection အတွက်လမ်းညွှန်ချက်များကိုကိုးကားပါ။ အကွဲကွဲအပြားပြားဖြစ်နေချိန်ကိုပိုမိုတိကျစွာချိန်ညှိရန် ၃ မိနစ်ကြာအောင်သို့မဟုတ်တိုစေရန်တုံ့ပြန်မှုစနစ်

    A-3

    အကွဲကွဲအပြားပြားကုသမှုပြီးနောက် DNA ၏ပုံမှန်မဟုတ်သောအရွယ်အစားဖြန့်ဖြူးခြင်း

    (က) အကွဲကွဲအပြားပြားဖြစ်စေသော reagent ၏မှားယွင်းသောအရည်ပျော်မှု (သို့) reagent သည်ပျော်ဝင်ပြီးနောက်လုံးဝရောနှောမသွားပါ။ 5 × Fragmentation Enzyme Mix reagent ကိုရေခဲတွင်ထားပါ။ အရည်ပျော်သွားလျှင်ပြွန်၏အောက်ခြေကိုညင်သာစွာပွတ်တိုက်ခြင်းဖြင့်ဆေးရည်ကိုအညီအမျှရောမွှေပါ။ reagent ကိုရေမလောင်းပါနဲ့။

    ခ) DNA ထည့်သွင်းသည့်နမူနာတွင် EDTA (သို့) အခြားညစ်ညမ်းမှုများပါ ၀ င်သည်၊ DNA အသန့်စင်ခြေလှမ်းတွင်ဆားအိုင်းယွန်းများနှင့် chelating အေးဂျင့်များပါ ၀ င်သည်။ DNA ကို 1 × TE တွင်ဖျက်သိမ်းလျှင်အကွဲကွဲအပြားပြားလုပ်ဆောင်ရန်ညွှန်ကြားချက်တွင်ပါရှိသောနည်းလမ်းကိုသုံးပါ။ အဖြေ၌ EDTA အာရုံစူးစိုက်မှုမသေချာလျှင်၎င်းအား DNA ကိုသန့်စင်စေပြီးနောက်ဆက်တွဲတုံ့ပြန်မှုအတွက် deionized ရေ၌ပျော်ရန်အကြံပြုသည်။

    ဂ) မတိကျသောကန ဦး DNA အရေအတွက်တွက်ချက်မှုအပိုင်းအစများ၏ DNA အရွယ်အစားသည် DNA ထည့်သွင်းမှုပမာဏနှင့်အနီးကပ်ဆက်စပ်နေသည်။ အကွဲကွဲအပြားပြားမဆက်ဆံမီတုံ့ပြန်မှုစနစ်တွင် DNA ၏အတိအကျပမာဏကိုဆုံးဖြတ်ရန် Qubit, Picogreen နှင့်အခြားနည်းလမ်းများ သုံး၍ DNA ၏တိကျသောပမာဏသည်တိကျသည်။

     d) တုံ့ပြန်မှုစနစ်ပြင်ဆင်မှုသည်ညွှန်ကြားချက်ကိုမလိုက်နာပါကအစိတ်စိတ်အမွှာမွှာတုံ့ပြန်မှုစနစ်ကိုပြင်ဆင်ခြင်းသည်ညွှန်ကြားချက်များအတိုင်းတင်းကျပ်စွာဆောင်ရွက်ရမည်။ အကောင်းဆုံးအကျိုးသက်ရောက်မှုကိုသေချာစေရန်တုံ့ပြန်မှုအစိတ်အပိုင်းအားလုံးကိုရေခဲတွင်ထားသင့်ပြီးအအေးခံပြီးနောက်တုံ့ပြန်မှုစနစ်ပြင်ဆင်မှုကိုလုပ်ဆောင်သင့်သည်။ ပြင်ဆင်မှုပြီးစီးပါကနှိုက်နှိုက်ချွတ်ချွတ်ရောမွှေပေးပါ။ ရေငုပ်မနေပါနဲ့။

    မေး - TIANSeq DirectFast DNA Library Kit (Illumina) အတွက်အရေးကြီးမှတ်စုများ (၄၉၉၂၂၅၉/ ၄၉၉၂၂၆၀)

    ၁။ မမှန်ကန်သောရောနှောနည်း (လေလှိုင်း၊ ကြမ်းတမ်းသောလှိုင်းများ၊ စသည်) သည်စာကြည့်တိုက်၏အပိုင်းအစများ (ပုံတွင်ပြထားသည့်အတိုင်း) ပုံမှန်မဟုတ်သောဖြန့်ဖြူးခြင်းကိုဖြစ်စေသည်၊ ထို့ကြောင့်စာကြည့်တိုက်၏အရည်အသွေးကိုထိခိုက်စေသည်။ ထို့ကြောင့် Fragmentation Mix တုံ့ပြန်မှုကိုပြင်ဆင်သောအခါရောမွှေရန်အပေါ်နှင့်အောက်သို့ညင်ညင်သာသာပွတ်ပေးပါ (သို့) ပွတ်သပ်ပြီးရောစပ်ရန်လက်ချောင်းထိပ်ကိုသုံးပါ။ ရေစီးနှင့်မရောရန်သတိပြုပါ။

    excel

    ၂။ သန့်ရှင်းစင်ကြယ်မှုမြင့်မားသော DNA ကိုစာကြည့်တိုက်ဆောက်လုပ်ရေးအတွက်သုံးရမည်

    DNA ကောင်းသော DNA ခိုင်မာမှု၊ electrophoresis band သည်အမြီးမပါဘဲ ၃၀ kb ကျော်ရှိသည်

    ■ OD260/230:> 1.5

    ■ OD260/280: 1.7-1.9

    ၃။ DNA ထည့်သွင်းမှုပမာဏတိကျရမည်။ Nanodrop ထက် DNA ကိုတွက်ချက်ရန် Qubit နှင့် PicoGreen နည်းလမ်းများကိုသုံးရန်အကြံပြုသည်။

    ၄။ DNA solution တွင် EDTA ပါဝင်မှုသည် EDTA သည်အကွဲကွဲအပြားပြားတုံ့ပြန်မှုအပေါ်အလွန်သြဇာရှိသည်ဟုဆုံးဖြတ်ရမည်။ EDTA ၏အကြောင်းအရာသည်မြင့်မားပါကနောက်ဆက်တွဲစစ်ဆေးမှုမတိုင်မီ DNA သန့်စင်ခြင်းကိုလုပ်ဆောင်ရန်လိုအပ်သည်။

    ၅။ အကွဲကွဲအပြားပြားဖြစ်စေသောတုံ့ပြန်မှုကိုရေခဲတွင်ပြင်ဆင်ရမည်။ အကွဲကွဲအပြားပြားဖြစ်စဉ်သည်တုံ့ပြန်မှုအပူချိန်နှင့်အချိန် (အထူးသဖြင့်မြှင့်တင်စက်ထည့်ပြီးနောက်) ကိုထိခိုက်လွယ်သည်။ တုံ့ပြန်မှုအချိန်တိကျသေချာစေရန် ကျေးဇူးပြု၍ ရေခဲပေါ်တွင်တုံ့ပြန်မှုစနစ်ကိုပြင်ဆင်ပါ။

    ၆။ အကွဲကွဲအပြားပြားတုံ့ပြန်မှုအချိန်သည်တိကျရမည်။ အကွဲကွဲအပြားပြားခြေလှမ်း၏တုံ့ပြန်မှုသည်အပိုင်းအစထုတ်ကုန်များ၏အရွယ်အစားကိုတိုက်ရိုက်ထိခိုက်လိမ့်မည်၊ ထို့ကြောင့်စာကြည့်တိုက်ရှိ DNA အပိုင်းအစများဖြန့်ဖြူးမှုကိုထိခိုက်စေသည်။

    Q: TIANSeq Fast RNA Library Kit (Illumina) အတွက်အရေးကြီးမှတ်စုများ (၄၉၉၂၃၇၅/၄၉၉၂၃၇၆)

    ၁။ ဤကိရိယာအတွက်နမူနာအမျိုးအစားကားအဘယ်နည်း။

    ဤကိရိယာ၏သက်ဆိုင်သောနမူနာအမျိုးအစားသည်စုစုပေါင်း RNA (သို့) ကောင်းမွန်သော RNA သမာဓိနှင့်သန့်စင်သော mRNA ဖြစ်နိုင်သည်။ စာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်ရန်စုစုပေါင်း RNA ကိုသုံးလျှင် rRNA ကိုအရင်ဖယ်ရှားရန် rRNA depletion kit (Cat#4992363/4992364/4992391) ကိုသုံးရန်အကြံပြုသည်။

    ၂။ FFPE နမူနာများကိုဤကိရိယာဖြင့်စာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်ရန်အသုံးပြုနိုင်သလား။

    FFPE နမူနာများတွင် mRNA သည်ဆွေမျိုးသားချင်းသမာဓိအားနည်းမှုနှင့်အတူအတိုင်းအတာတစ်ခုထိကျဆင်းလိမ့်မည်။ စာကြည့်တိုက်ဆောက်လုပ်ရေးအတွက်ဤကိရိယာကိုသုံးသောအခါအကွဲကွဲအပြားပြားဖြစ်စေရန်အချိန်ဖြုန်းရန် (အကွဲကွဲအပြားပြားဖြစ်အောင်အချိန်တို (သို့) အကွဲကွဲအပြားပြားဖြစ်အောင်မလုပ်ဆောင်ပါ) ။

    ၃။ ကုန်ပစ္စည်းလက်စွဲတွင်ဖော်ပြထားသောအရွယ်အစားရွေးချယ်ရေးအဆင့်ကိုအသုံးပြုခြင်း၊ ထည့်သွင်းထားသောအပိုင်းသည်အနည်းငယ်သွေဖည်သွားစေခြင်းငှါအဘယ်အရာဖြစ်စေသနည်း။

    ဤထုတ်ကုန်လက်စွဲ၌အရွယ်အစားရွေးချယ်ခြင်းအဆင့်နှင့်အညီအရွယ်အစားရွေးချယ်ခြင်းကိုတင်းကျပ်စွာဆောင်ရွက်ရမည်။ သွေဖည်မှုရှိလျှင်အကြောင်းပြချက်မှာသံလိုက်ပုတီးများသည်အခန်းအပူချိန်နှင့်မျှတမှုမရှိခြင်း (သို့) အပြည့်အဝမရောခြင်း၊ pipette မတိကျခြင်း (သို့) အရည်သည်အစွန်အဖျား၌ကျန်နေခြင်းဖြစ်နိုင်သည်။ စမ်းသပ်မှုအတွက်စုပ်ယူမှုနည်းသောအကြံပေးချက်များကိုသုံးရန်အကြံပြုသည်။

    ၄။ စာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်ရာတွင် adapter များရွေးချယ်ခြင်း

    စာကြည့်တိုက်ဆောက်လုပ်ရေးကိရိယာတွင် adapter reagent မပါ ၀ င်ပါ၊ ဤ kit ကို TIANSeq Single-Index Adapter (Illumina) (4992641/4992642/4992378) နှင့်တွဲသုံးရန်အကြံပြုသည်။

    ၅။ စာကြည့်တိုက်၏ QC

    စာကြည့်တိုက်အရေအတွက်ထောက်လှမ်းခြင်း: စာကြည့်တိုက်၏အစုလိုက်အပြုံလိုက်အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့်အံသွားအာရုံစူးစိုက်မှုကိုဆုံးဖြတ်ရန်သုံးသည်။ ထုတ်ကုန်သည်လက်စွဲစာအုပ်နှင့်အညီတင်းကျပ်စွာလုပ်ဆောင်သည်။ စာကြည့်တိုက်၏အာရုံစူးစိုက်မှုသည်ယေဘူယျအားဖြင့် NGS အစီအစဉ်၏လိုအပ်ချက်များနှင့်ကိုက်ညီလိမ့်မည်။ စာကြည့်တိုက်ဖြန့်ဖြူးမှုအပိုင်းကိုရှာဖွေခြင်း၊ စာကြည့်တိုက်ဖြန့်ဖြူးခြင်းအပိုင်းကိုရှာဖွေရန် Agilent 2100 Bioanalyzer ကိုသုံးပါ။

    6. အသံချဲ့စက်ဝန်းနံပါတ်ရွေးချယ်ခြင်း

    ညွှန်ကြားချက်များအရ PCR စက်ဝန်းအရေအတွက်သည် ၆-၁၂ ဖြစ်ပြီးနမူနာထည့်သွင်းမှုအရလိုအပ်သော PCR စက်ဝန်းအရေအတွက်ကိုရွေးချယ်သင့်သည်။ အထွက်နှုန်းမြင့်စာကြည့်တိုက်များတွင် Agilent 2100 Bioanalyzer အားရှာဖွေခြင်း၌ပစ်မှတ်အကွာအဝေးထက်အနည်းငယ်ပိုကြီးသောအားဖြင့်၎င်းသည်ကွဲပြားသောဒီဂရီများတွင်ဖြစ်ပေါ်သည်၊ သို့မဟုတ် QPCR ၏တွေ့ရှိမှုသည် qPCR ထက်နိမ့်သည်။ အသံချဲ့စက်အသံပျော့သည်ပုံမှန်ဖြစ်စဉ်တစ်ခုဖြစ်ပြီးစာကြည့်တိုက်အစီအစဉ်များနှင့်နောက်ဆက်တွဲအချက်အလက်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကိုမထိခိုက်ပါ။

    ၇။ Agilent 2100 Bioanalyzer ၏ထောက်လှမ်းမှုပရိုဖိုင်းတွင်တွေ့ရပါသည်

    Agilent 2100 Bioanalyzer ထောက်လှမ်းမှု၌ spikes များ၏ပုံပန်းသဏ္ဌာန်သည်မညီညာသောအကွဲကွဲအပြားပြားဖြစ်ခြင်းကြောင့်အချို့အရွယ်အစား၌အပိုင်းအစများပိုများလာပြီး၎င်းသည် PCR ကြွယ်ဝမှုပြီးနောက်ပိုမိုသိသာထင်ရှားလာလိမ့်မည်။ ဤကိစ္စတွင်၊ အရွယ်အစားရွေးချယ်ခြင်းကိုမလုပ်ဆောင်ရန်အကြံပြုသည်၊ ဆိုလိုသည်မှာအပိုင်းအစဖြန့်ဝေမှုသည်သေးငယ်ပြီးစုစည်းပြီးတစ်သားတည်းဖြစ်တည်ခြင်းကိုတိုးတက်စေနိုင်သည်။

    မင်းရဲ့ message ကိုဒီမှာရေးပြီးငါတို့ဆီပို့ပါ