flexibility မြင့်မားသောပြောင်းလွယ်ပြင်လွယ်၊ တုံ့ပြန်မှုတစ်ခုတွင်ကြီးမားသောနမူနာနမူနာထုတ်ယူမှုအတွက်သင့်တော်သောနမူနာပမာဏ၏ရိုင်းပြသောအကွာအဝေး
■အထွက်နှုန်းမြင့်ခြင်း၊ မိုးရွာသွန်းမှုနည်းလမ်းသည်နမူနာအားဖြင့် RNA အထွက်နှုန်းကိုအမြင့်ဆုံးဖြစ်စေသည်။
■ကျယ်ပြန့်စွာအသုံးပြုခြင်း - အပင်နှင့်တိရစ္ဆာန်တစ်သျှူးများ၊ ယဉ်ကျေးသောဆဲလ်များ၊ သွေး၊ ခန္ဓာကိုယ်အရည်စသည်တို့ကဲ့သို့ကွဲပြားသောနမူနာများအတွက်သင့်တော်သည်။
■လျင်မြန်သောလုပ်ဆောင်ချက် - Genomic DNA ကို ၁ နာရီအတွင်းရရှိနိုင်သည်။
အမျိုးအစား: မိုးရေကိုအခြေခံသည်
နမူနာ: ဗိုင်းရပ်စ်၊ ဘက်တီးရီးယား၊ မှို၊ တိရစ္ဆာန်၊ အပင်တစ်သျှူး၊ ယဉ်ကျေးသောဆဲလ်များနှင့်ခန္ဓာကိုယ်အရည်
ပစ်မှတ် RNA
စစ်ဆင်ရေးအချိန်: ~ ၁ နာရီ
လျှောက်လွှာများ: TRNzol Universal reagent သည်သန့်စင်ထားသော RNA တွင် DNA နှင့်ပရိုတိန်းကဲ့သို့အညစ်အကြေးများကို minimize လုပ်နိုင်ပြီး Northern Blot, Dot Blot, PolyA စိစစ်ခြင်း၊ in vitro ဘာသာပြန်ခြင်း၊ RNase ကာကွယ်မှုခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း၊ cDNA စာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်ခြင်းကဲ့သို့သောမော်လီကျူးဇီဝဗေဒစမ်းသပ်မှုများအတွက်တိုက်ရိုက်သုံးနိုင်သည်။ RT-PCR၊ အချိန်နှင့်တပြေးညီ PCR နှင့် high-throughput sequencing
ထုတ်ကုန်အားလုံးသည် ODM/OEM အတွက်စိတ်ကြိုက်ပြုလုပ်နိုင်ပါသည်။ အသေးစိတ်အတွက်၊ကျေးဇူးပြုပြီး Customized Service (ODM/OEM) ကိုနှိပ်ပါ။
နည်းလမ်း - ကြွက်အသည်း ၃၀ မီလီဂရမ်၊ ဆန်အရွက် ၁၀၀ မီလီဂရမ်ကိုနိုက်ထရိုဂျင်အရည်ကြိတ်ခြင်းဖြင့်စုဆောင်းခဲ့သည်။ ၁ × ၁၀6HepG2 မွေးမြူထားသောဆဲလ်များနှင့် 700 Sal Saccharomyces Cerevisiae culture medium (OD600 = 0.9) ကို centrifugation ဖြင့်စုဆောင်းခဲ့သည်။ TIANGEN မှ TRNzol Universal Reagent ၁ မီလီလီတာနှင့်ပေးသွင်းသူ L နှင့် T တို့မှသက်ဆိုင်ရာထုတ်ကုန်များကိုနမူနာတစ်ခုစီတွင်ထည့်ပြီး RNA ထုတ်ယူခြင်းကိုပေးသွင်းသူတစ် ဦး ချင်းစီအလိုက်သတ်မှတ်ချက်များအတိုင်းလုပ်ဆောင်ခဲ့သည်။ နမူနာလေးခုအတွက်ရှင်းလင်းချက်ပမာဏသည် ၈၀ μl၊ ၅၀ μl၊ ၃၀ μlနှင့် ၃၀ μlအသီးသီးဖြစ်သည်။ eluate ၏ ၃ μlကိုတစ်လမ်းသွားတွင်တင်ခဲ့သည်။
MIII: TIANGEN Marker III;
electrophoresis ကို 1% agarose ဖြင့်မိနစ် ၃၀ ကြာ 6 V/cm တွင်ပြုလုပ်သည်။
ရလဒ်များ - TIANGEN TRNzol Universal Reagent သည်မြင့်မားသောသန့်ရှင်းမှုနှင့်ကြွက်အသည်း၊ ဆန်ရွက်၊ ယဉ်ကျေးသောဆဲလ်များနှင့်တဆေးနမူနာများမှမြင့်မားသောသန့်ရှင်းစင်ကြယ်မှုနှင့်ကောင်းမွန်သောသမာဓိ RNA တို့ကိုထုတ်ယူနိုင်သည်။ RNA အရည်အသွေးသည်ပေးသွင်းသူ L နှင့် T ထုတ်ကုန်များနှင့်နှိုင်းယှဉ်ပါသို့မဟုတ်အနည်းငယ်ပိုမြင့်သည်။
A-1 Cell lysis သို့မဟုတ် homogenization မလုံလောက်ပါ
---- နမူနာအသုံးပြုမှုကိုလျှော့ချပါ၊ lysis buffer ပမာဏကိုတိုးပါ၊ homogenization နှင့် lysis အချိန်ကိုတိုးမြှင့်ပါ။
A-2 နမူနာပမာဏသည်ကြီးလွန်းသည်
---- အသုံးပြုသောနမူနာပမာဏကိုလျှော့ချပါ (သို့) lysis ကြားခံပမာဏကိုတိုးပါ။
A-1 လုံလောက်သောဆဲလ်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း (သို့) တသားတည်းဖြစ်စေခြင်း
---- နမူနာအသုံးပြုမှုကိုလျှော့ချပါ၊ lysis buffer ပမာဏကိုတိုးပါ၊ homogenization နှင့် lysis အချိန်ကိုတိုးမြှင့်ပါ။
A-2 နမူနာပမာဏသည်ကြီးလွန်းသည်
---- ကျေးဇူးပြု၍ အများဆုံးလုပ်ဆောင်နိုင်သောစွမ်းရည်ကိုကိုးကားပါ။
A-3 RNA ကိုကော်လံမှလုံးလုံးလျားလျားမဖျက်ပါ
---- RNase-free ရေထည့်ပြီးနောက် centrifuging မလုပ်မီမိနစ်အနည်းငယ်ထားပါ။
A-4 Ethanol ကိုထုတ်လုပ်သည်
---- ဆေးပြီးသောအခါ centrifuge ကိုတစ်ဖန်ပြန်ဆေးပြီးအတတ်နိုင်ဆုံးဖယ်ရှားပါ။
A-5 Cell culture medium သည်လုံးဝမဖယ်ရှားပါ
---- ဆဲလ်များကိုစုဆောင်းသောအခါယဉ်ကျေးမှုအလတ်စားကိုတတ်နိုင်သမျှဖယ်ရှားပါ။
A-6 RNAstore တွင်သိုလှောင်ထားသောဆဲလ်များကိုထိရောက်စွာ centrifuged မလုပ်ပါ
---- RNAstore သိပ်သည်းဆသည်ပျမ်းမျှဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုအလယ်အလတ်ထက်ပိုကြီးသည်။ ထို့ကြောင့် centrifugal force ကိုတိုးသင့်သည်။ ၎င်းသည် 3000x g တွင် centrifuge ကိုအသုံးပြုရန်အကြံပြုသည်။
A-7 နမူနာ၌ RNA ပါဝင်မှုနည်းပါးခြင်းနှင့်ကြွယ်ဝခြင်း
---- အထွက်နှုန်းနိမ့်သည်ကိုနမူနာအားဖြင့်ဆုံးဖြတ်ရန်အပြုသဘောနမူနာကိုသုံးပါ။
A-1 ပစ္စည်းသည်မလတ်ဆတ်ပါ
---- လတ်ဆတ်သောတစ်သျှူးများကိုအရည်နိုက်ထရိုဂျင်တွင်ချက်ချင်းသိုလှောင်ခြင်းသို့မဟုတ်ထုတ်ယူခြင်းအကျိုးသက်ရောက်မှုကိုသေချာစေရန် RNAstore reagent ထဲသို့ချက်ချင်းထည့်ထားသင့်သည်။
A-2 နမူနာပမာဏသည်ကြီးလွန်းသည်
---- နမူနာပမာဏကိုလျှော့ချပါ။
A-3 RNase ညစ်ညမ်းမှုn
---- ကိရိယာတွင်ပေးထားသောကြားခံသည် RNase မပါ ၀ င်သော်လည်း၎င်းသည်ထုတ်ယူခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်အတွင်း RNase ကိုညစ်ညမ်းရန်လွယ်ကူပြီးဂရုတစိုက်ကိုင်တွယ်သင့်သည်။
A-4 Electrophoresis ညစ်ညမ်းမှု
---- electrophoresis buffer ကိုအစားထိုးပြီးလူသုံးနှင့် Loading Buffer သည် RNase ညစ်ညမ်းမှုမရှိကြောင်းသေချာပါစေ။
A-5 electrophoresis အတွက်တင်ရာတွင်အလွန်များနေသည်
---- နမူနာတင်သောပမာဏကိုလျှော့ချပါ၊ ရေတွင်းတစ်ခုစီ၏သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးသည် 2 μgထက်မပိုသင့်ပါ။
A-1 နမူနာပမာဏသည်ကြီးလွန်းသည်
---- နမူနာပမာဏကိုလျှော့ချပါ။
A-2 နမူနာအချို့တွင် DNA မြင့်မားမှုရှိပြီး DNase ဖြင့်ကုသနိုင်သည်။
---- RNase-Free DNase ကုသမှုကိုရရှိသော RNA solution သို့ RNA ကိုကုသမှုပြီးနောက်နောက်ဆက်တွဲစမ်းသပ်မှုများအတွက်တိုက်ရိုက်သုံးနိုင်သည်၊ သို့မဟုတ် RNA သန့်စင်ပစ္စည်းများဖြင့်ထပ်မံသန့်စင်နိုင်သည်။
ဖန်ခွက်များအတွက် ၁၅၀ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင် ၄ နာရီကြာဖုတ်ပါ။ ပလတ်စတစ်ကွန်တိန်နာများအတွက် 0.5 M NaOH တွင် ၁၀ မိနစ်နှစ်မြှုပ်ပါ၊ ထို့နောက် RNase- ကင်းစင်သောရေဖြင့်သေချာစွာဆေးပြီးမှ RNase ကိုဖယ်ရှားရန်ပိုးသတ်ပါ။ စမ်းသပ်မှုတွင်သုံးသောဓာတ်ကူပစ္စည်းများ (သို့) အဖြေများ၊ အထူးသဖြင့်ရေသည် RNase ကင်းစင်ရမည်။ ဓာတ်ကူပြင်ဆင်မှုအားလုံးအတွက် RNase- ကင်းစင်သောရေကိုသုံးပါ။ (သန့်ရှင်းသောဖန်ပုလင်းထဲသို့ရေထည့်ပါ၊ DEPC ကိုနောက်ဆုံး ၀.၁% (V/V) နောက်ဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှု၊ တစ်ချိူ့နှင့် autoclave ထည့်ပါ။
စတင်တည်ထောင်ကတည်းကကျွန်ုပ်တို့၏စက်ရုံသည်နိယာမကိုလိုက်နာခြင်းဖြင့်ပထမကမ္ဘာအဆင့်ထုတ်ကုန်များကိုတီထွင်ခဲ့သည်
အရည်အသွေးပထမ ကျွန်ုပ်တို့၏ထုတ်ကုန်များသည်စက်မှုလုပ်ငန်းတွင်အလွန်နာမည်ကောင်းရခဲ့ပြီးဖောက်သည်အသစ်နှင့်အဟောင်းများကြားတွင်အဖိုးတန်လက်ဖွဲ့ပစ္စည်းများဖြစ်သည်။